Caracterização funcional das regiões promotoras dos genes BhC4-1 e BhB10-1 de Bradysia hygida em Drosophila transgênicas

Resumo

Os pufes de DNA, que se formam nos cromossomos politênicos da glândula salivar de Sciaridae, são sítios onde ocorrem simultaneamente a amplificação e a transcrição gênica. Ambos processos ocorrem de modo regulado no desenvolvimento, ao final do estágio larval, e em um tecido específico, a glândula salivar, e estão sob o controle do hormônio ecdisona. Deste modo, os pufes de DNA se apresentam como um sistema interessante para o entendimento da regulação da amplificação e transcrição bem como as interações que possam ocorrer entre estes processos. Uma das limitações deste modelo biológico é a inexistência de um sistema que permita a transformação deste organismo. Entretanto, linhagens de Drosophila, transformadas com fragmentos das regiões promotoras dos genes dos pufes de DNA II/9-1, de Sciara coprophila, e BhC4-1, de Bradysia hygida, têm demonstrado que os fatores necessários para a regulação temporal e tecidual são conservados em Drosophila (Bienz-Tadmor et al, 1991; Monesi et al., 1996), abrindo a possibilidade de realização de ensaios funcionais de elementos controladores da transcrição de genes amplificados em pufes de DNA. O presente projeto tem por objetivo a identificação de elementos controladores da transcrição nas regiões promotoras dos genes BhC4-1 e BhB10-1 de B. hygida através da realização de ensaios funcionais em Drosophila transgênicas. Além disso, visa iniciar uma análise da ação do hormônio ecdisona na ativação do promotor do gene BhC4-1, através da realização de ensaios "in vitro", em linhagens transgênicas já estabelecidas. Outro ponto importante é que a realização deste projeto acarretará no estabelecimento, junto ao Departamento de Morfologia da FMRP-USP, da metodologia de transformação de Drosophila mediada pelo elemento P. Durante meu doutorado, estagiei durante um ano e meio dentro do programa de bolsa de doutorado tipo sanduíche do CNPq, no laboratório do Prof. Dr. Marcelo Jacobs-Lorena, na Case Western Reserve University (Cleveland-OH), onde fui treinada nesta metodologia. O estabelecimento; desta metodologia será também importante no estudo dos mecanismos de amplificação. É tentador pensar na utilização destes ensaios funcionais heterólogos com vistas à caracterização de elementos envolvidos no controle da amplificação que ocorre em pufes de DNA. Apesar de não ter sido verificada a amplificação nos dois casos tentados até o momento (Bienz-Tadmor et al., 1991; Monesi et al., 1996), o fato dos constructos testados não conterem regiões de origem de replicação não permite descartar a hipótese de que fatores envolvidos no controle da amplificação em pufes de DNA sejam conservados em Drosophila. Esta hipótese é razoável se pensarmos no fato de que, em Drosophila, embora sem a formação de pufes de DNA, um fenômeno similar de amplificação ocorre nas células foliculares ovarianas, no final da ovogênese. (AU)