Identificação de elementos cis e de fatores transativadores envolvidos na transcrição da enzima esteroidogênica P450c17 em células NCI-H295

• Processo: 97/07170-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Pesquisa
• Data de Início da vigência: 06 de janeiro de 1998
• Data de Término da vigência: 05 de janeiro de 2000
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Chin Jia Lin
• Beneficiário: Chin Jia Lin
• Pesquisador Anfitrião: Walter L. Miller
• Instituição Sede: Pessoa Física
• Instituição Anfitriã: University of California, San Francisco (UCSF), Estados Unidos
• Assunto(s): Endocrinologia Fatores de transcrição Córtex suprarrenal
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Acth | Endocrinologia | Esteroidogenese | Fatores De Transcricao | Supra-Renal

Resumo

O citocromo P450c17 e uma enzima esteroidogênica que possui as atividades da 17-hidroxilase e da 17,20 liase. A presença ou a ausência das atividades da 17-hidroxilase e/ou da 17,20 liase determina se um dado tecido esteroidogênico ira produzir mineralo, glicocorticoide ou esteroides sexuais. Portanto, a expressão ou não do P450c17 e a chave da diversidade qualitativa da esteroidogênese. Em humanos, o P450c 17 é expresso na fasciculada e reticular do córtex adrenal e nas células de Leydig, porém não é expresso na glomerulosa do córtex adrenal, no ovário fetal, na placenta nem nas células da granulosa do ovário adulto. O mecanismo que define esta especificidade tissular da expressão do P450c17 não está bem esclarecido, a sua elucidação e de grande importância para a compreensão da regulação da esteroidogênese e da gênese dos distúrbios da secreção hormônios esteroides. O presente projeto visa identificar e caracterizar os elementos cis-ativadores e os fatores transativadores envolvidos na expressão do P450c17 no córtex adrenal humano. Utilizar-se-ão as células NCI-H295, originárias do carcinoma do córtex adrenal humano, como modelo experimental. A identificação dos elementos cis será feita testando a atividade dos mutantes delecionais do promotor do P450c17 nas células NCI-H295 e será confirmada através da fusão dos supostos elementos cis com o promotor heterólogo TK32 e mutagênese dirigida. A interação dos fatores transativadores do extrato nuclear das células NCI-H295 com os elementos cis será avaliada através de experimentos de ''band shift" e mutagênese dirigida. Os fatores transativadores específicos envolvidos serão caracterizados através da ''UV-crosslinking" e de hibridização tipo "Southwesten". (AU)