Estudo das vias de sinalização, da expressão gênica e do efeito biológico da corticotropina (ACTH), peptídeo N-terminal da POMC (N-POMC) e do fator de crescimento de fibroblastos (FGF2) em culturas primárias de células da suprarrenal de rato

• Processo: 06/00607-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2006
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Claudimara Ferini Pacicco Lotfi
• Beneficiário: Gabriele Ebling Mattos
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Biologia celular Quinases de proteína quinase ativadas por mitógeno Hormônio adrenocorticotrópico Hormônio liberador de corticotrofina Sinalização intracelular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Acth | Cultura Primaria | Fgf2 | Proliferacao | Sinalizacao Intracelular | Supra Renal | Biologia Celular

Resumo

A cascata de fosforilação das proteínas quinases ativadas por mitogênicos (MAPKs) é uma via importante de sinalização celular e tem sido usada como um marcador bioquímico na avaliação do potencial das ações de hormônios e fatores de crescimento na proliferação, diferenciação e morte celular. Resultados publicados pelo nosso laboratório mostraram que células de culturas primárias de suprarrenal de rato estimuladas com ACTH (corticotropina) não ativam a via ERK1/2-MAPK, mas ativam CREB (proteína que se liga a elementos responsivos a cAMP) e provavelmente outras vias, enquanto FGF2 (fator de crescimento de fibroblasto) ativa fortemente, mas de maneira transiente, ERK1/2. Além disso, experimentos de sinalização com inibidores farmacológicos e análise da proliferação por incorporação de BrdU mostraram que o ACTH não tem efeito mitogênico em culturas primárias de adrenal de rato, apesar de estimular a expressão da proteína c-Fos, um conhecido marcador de mitogenicidade. No entanto, ainda desconhecemos outras vias de sinalização que podem estar sendo ativadas pelo ACTH, pelo suposto mitogênico da suprarrenal o peptídeo 1-28 N-terminal da POMC (pró-opiomelanocortina) e o mitogênico protótipo em vários tipos celulares, o FGF2, e suas interações nessas culturas de células. Além disso, são incipientes os estudos da modulação da expressão gênica que decorre dessa sinalização em células normais da suprarrenal de rato, células glomerulosas (G) e células fasciculadas/reticulares (F/R). Portanto, nesse projeto temos como objetivo complementar e estender os estudos já iniciados das vias de sinalização em culturas primárias de suprarrenal de rato com: 1- a análise das vias JNK/c-Jun, PKC e Akt/PKB em culturas de células tratadas com ACTH, N-POMC e FGF2; 2- a avaliação do efeito biológico desses fatores através da utilização de protocolos específicos e elaborados para a análise da sobrevivência, senescência, apoptose e proliferação; 3- utilização de inibidores farmacológicos e moleculares (RNA de interferência) para bloquear a sinalização ativada pelo ACTH, N-POMC e FGF2 e com isso verificar as alterações dos efeitos biológicos analisados; e por fim, 4- analisar as consequências da sinalização através da análise da expressão de genes envolvidos com o controle do ciclo celular e apoptose utilizando microarray de membrana, que contém sequencias específicas relacionadas com o ciclo celular e apoptose, que após ativação da sinalização pelo ACTH, N-POMC e FGF2 poderão ser detectados como diferencialmente expressos. Através dessas análises poderemos sugerir os mecanismos pelos quais o ACTH, o peptídeo N-POMC e o FGF2 exercem seus efeitos biológicos em culturas primárias de células isoladas da glomerulosa e da fasciculada/reticular do córtex da suprarrenal. (AU)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

MATTOS, Gabriele Ebling. Vias de sinalização e efeito biológico da corticotropina (ACTH), do peptídeo NH2-terminal da pró-opiomelanocortina (N-POMC) e do fator de crescimento de fibroblastos (FGF2) em culturas primárias de células da suprarrenal de rato.. 2011. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI) São Paulo.