Clonagem e expressão do gene da proteína N do vírus da bronquite infecciosa em leveduras

• Processo: 02/06083-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2002
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2004
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Medicina Veterinária Preventiva
• Pesquisador responsável: Helio Jose Montassier
• Beneficiário: Aliandra Maura Gibertoni Malaman
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (FCAV). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Jaboticabal. Jaboticabal , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 01/14950-3 - Bronquite infecciosa das galinhas: interações entre variabilidade genética e antigênica em estirpes do vírus da bronquite infecciosa e reflexos sobre a imunidade, o imunodiagnóstico e a imunoprofilaxia, AP.TEM
• Assunto(s): Bronquite infecciosa animal Clonagem animal Diagnóstico Vacinas Saccharomyces cerevisiae Vírus da bronquite infecciosa
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Clonagem | Nucleoproteina | Saccharomyces Cerevisiae

Resumo

O vírus da bronquite infecciosa (VBI) provoca uma das doenças aviárias mais difíceis de serem controladas nas criações avícolas comerciais, requerendo que sejam desenvolvidas novas preparações de imunógenos, bem como de técnicas de diagnóstico laboratorial e também de sorodiagnóstico cada vez mais efetivas. Nesse sentido, verifica-se que as vacinas assim como os ensaios imunoenzimáticos para esse vírus podem ser aprimorados, uma vez que sejam disponibilizadas preparações de antígenos mais definidos que envolvam a clonagem e a expressão dos genes codificadores das proteínas virais mais relevantes sob o ponto de vista de imunogenicidade. Em vista disso, decidiu-se então como objetivo principal deste projeto de pesquisa fazer o desenvolvimento de um sistema heterólogo (Saccharomyces cerevisiae) para a expressão do gene da nucleoproteína N do VBI. Para tanto, será obtido o cDNA do gene de nucleoproteína N do VBI, que depois de amplificado por PCR, será clonado no vetor específico de expressão para levedura (S. cerevisiae), para em seguida à transformação de protoplastos de leveduras, serem produzidas as células portadoras do gene da proteína N, sendo feita a confirmação da obtenção de organismos transgênicos pelas técnicas de Southern e Northern Blot, bem como a separação cromatografica da proteína fecombinante N e a caracterização imunoquímica dessa mesma proteína recombinante por SDS-PAGE, Western Blot e Elisa. (AU)