Investigação nas mudanças conformacionais numa proteína formadora de canal: alfa-toxina de Staphylococcus aureus

• Processo: 94/01581-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 1994
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 1996
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
• Pesquisador responsável: Richard John Ward
• Beneficiário: Raquel Kely Bortoleto Bugs
• Instituição Sede: Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas (IBILCE). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José do Rio Preto. São José do Rio Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Biologia molecular Espectroscopia Staphylococcus aureus Toxinas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Alfa Toxina | Espectroscopia | Mudanca Conformacional | Mutacao Sitio Dirigida

Resumo

Staphylococcus aureus é considerado como o mais potente microorganismo patogênico humano. Secreta diversas exotoxinas entre as quais a a-toxina. A a-toxina pertence a uma família de toxinas que promove a formação de poros, com efeito letal causando a Use dos eritrócitos em diversas espécies. Estudos comparativos referentes a tolerância da a-toxina em células de coelho e humanas, Indicam um tipo de interação inespecífica com a membrana. Essas interações conduzem a formação de discretos canais de tamanho finito junto a membrana celular, o mecanismo molecular básico das formações dos canais é parcialmente entendido. Um modelo sugere a associação de monômero da α-toxina na fase aquosa associados à membrana ligados ou a um receptor ou diretamente na membrana lipídica. Não se conhece em que estágio do processo de hexamerização e mudança conformacional ocorre e qual sua relação com a formação dos canais de cálcio. Até o momento não existe um modelo molecular detalhado do mecanismo de ação. Pretendemos estabelecer neste trabalho correlações entre a estrutura e função da a-toxina, utilizando técnicas em biologia molecular e bioquímicas para a produção e purificação de proteínas mutantes, e métodos de análise espectroscópicas: fluorescência do triptofano, dicroísmo circular e ligação do cálcio através de indicadores metalocrônico para avaliação do funcionamento das toxinas mutantes em comparação com a toxina selvagem. (AU)