Caracterização molecular de genes preferenciamente expressos na fase leveduriforme patogênica de Paracoccidioides brasiliensis através das técnicas de macroarray e de SSH (Suppression Subtractive Hybridization)

• Processo: 02/09176-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2003
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2005
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Gustavo Henrique Goldman
• Beneficiário: Everaldo dos Reis Marques
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Macroarray | Paracoccidioides Brasiliensis

Resumo

O Paracoccidioides brasiliensis, um fungo termo-dimórfico, é o agente causador da micose sistêmica mais prevalente na América Latina, com áreas endêmicas no Brasil, Colômbia e Venezuela. Para entender os eventos no estabelecimento da infecção e doença, é importante a identificação de genes expressos na fase de levedura patogênica do P. brasiliensis. Foram seqüenciadas 13490 ESTs ("Expression Sequenees Tags") de uma biblioteca de cDNA da fase leveduriforme patogênica de P. brasiliensis de ambas as extremidades, 5'e 3'de cada clone. As ESTs foram "clusterizadas" gerando 1397 "contigs" e 3295 "singlets". Os arranjos de hibridizações de DNA ("Macroarrays e Microarrays") permite simultaneamente a investigação das mudanças na expressão e análise de milhares de genes. Realizaremos um "screening" diferencial com a técnica de "macroarray" utilizando os 1397 "contigs" com o objetivo de evidenciar transcritos mais expressos em ambas as formas (mícelial saprófita e leveduriforme patogênica) de P. brasiliensis. Utilizaremos também a técnica de SSH ("Suppression Subtractive Hybridization") que permite subtrair e amplificar transcritos diferencialmente expressos dentro de duas populações de RNA mensageiro. Alguns dos genes isolados a partir de ambas as técnicas como preferencialmente expressos na fase leveduriforme, serão confirmados, em relação ao nível de transcrição utilizando a técnica de RT-PCR em tempo real. (AU)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

MARQUES, Everaldo dos Reis. Caracterização molecular de genes preferencialmente expressos na fase leveduriforme patogênica de ´Paracoccidioides brasiliensis´ através das técnicas de ´Macroarray´ e de SSH (Suppression Substractive Hybridization). 2005. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (PCARP/BC) Ribeirão Preto.