Contribuicao ao estudo das modificacoes morfo-fisiologicas e da expressao antigenica durante os processos de adesao e invasao as culturas de celulas hela por cepas do p. brasiliensis.

• Processo: 98/00508-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 1998
• Data de Término da vigência: 31 de março de 1999
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia
• Pesquisador responsável: Aureo Tatsumi Yamada
• Beneficiário: Eliane Aparecida de Andrade
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Citoesqueleto Paracoccidioides brasiliensis
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Citoesqueleto | Paracoccidioides Brasiliensis | Patogenicidade Fungos

Resumo

Dando continuidade às pesquisas já desenvolvidas, que permitiram obtenção de resultados extremamente relevantes, no que diz respeito à elaboração de hipóteses capazes de esclarecer os mecanismos básicos de patogenicidade do P. brasiliensis, propomos neste projeto estudar as modificações morfo-funcionais do fungo e da célula hospedeira, durante o processo de infecção às culturas de células HeLa. Desta forma, alterações do citoesqueleto deverão ser verificadas durante os processos de adesão e invasão destas células, por diferentes cepas na fase leveduriforme do P. brasiliensis, em preparações reveladas por diferentes técnicas imunocitoquímicas. Neste sentido, as observações dos preparados deverão utilizar microscopia de imunofluorescência, epi-fluorescência com contraste de fase, microscopia de varredura, microscopia eletrônica de transmissão e microscopia confocal. Nesta ultima abordagem, utilizaremos o microscópio confocal já instalado e em funcionamento na UNICAMP, adquirido com verba da FAPESP através de Convênio entre o Instituto de Biologia e a Faculdade de Engenharia de Alimentos, sendo que somos colaboradores diretos do projeto de solicitação do mesmo, além do projeto que também apoiado por esta Instituição, adquiriu um M.E.T. com tecnologia atualizada. Através de estudos a serem realizados utilizando vários soros policlonais contra diferentes cepas do P. brasiliensis e formas infectantes do fungo, preparados em diferentes animais (coelhos, camundongos e ratos), objetivamos também neste projeto um maior entendimento da expressão antigênica e fenotípica deste patógeno, em diferentes fases do processo de infecção à cultura HeLa. Paralelamente, propomos avaliar a presença de reatividade antigênica destas formas infectantes, frente aos soros anti-filtrado de cultura, anti-gp43 e pool de soros de pacientes com PCM, utilizando principalmente técnicas de immunegold e imunofluorescência, comparando cepas mais virulentas (Pb 113) e menos virulentas (Pb265). No que diz respeito ao estudo de alterações morfo-fisiológicas, tanto do patógeno, como da célula hospedeira, durante os mecanismos de adesão e invasão celular, em especial alterações do citoesqueleto verificando-se modificações da rede de actina e de micro-túbulos, serão avaliados. (AU)