Clonagem, expressão e caracterização funcional do fator indutor de proteólise (PIF) recombinante

• Processo: 02/09990-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2003
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2005
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Farmacologia Bioquímica e Molecular
• Pesquisador responsável: José Ernesto Belizario
• Beneficiário: Humberto Miguel Garay Malpartida
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Caquexia Proteólise
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cancer | Caquexia | Caspases | Proteasoma

Resumo

Caquexia é uma síndrome que se manifesta em pacientes portadores de doenças neoplásicas, diabetes, queimaduras, traumas e infecções. A depleção da massa muscular é uma das manifestações metabólicas mais proeminentes da caquexia. Vários fatores parecem participar do catabolismo na indução de catabolismo de proteínas musculares, sendo um dos mais importantes o Fator Indutor de Proteólise (PIF). O presente projeto tem por objetivo a clonagem e expressão da proteína PIF recombinante para testes biológicos. Na primeira etapa desse trabalho o cDNA do PIF será clonado em vetores plasmidiais os quais serão utilizados para a transformação e expressão em bactéria e em células de linhagem de eucariótos. Na etapa seguinte do projeto, os ensaios de expressão, produção e purificação de proteína serão otimizados e para a obtenção de amostras de proteínas recombinantes de alta pureza na forma não glicosilada e na forma glicosilada. A proteína recombinante será utilizada para produção de anticorpos policlonais e testes biológicos. Nos ensaios de atividade biológica de indução de proteólise celular serão utilizados os modelos com músculos soleus de ratos e cultura de miotúbulos da linhagem de mioblastos de camundongo C2C12. Em ambos ensaios, o objetivo é demonstrar se PIF recombinate (forma proteína e forma glicoproteína) é capaz de aumentar a atividade das enzimas caspases e enzimas proteolíticas do sistema ubiquitina-proteasoma de degradação intracelular. (AU)