Caracterizacao de bacteriofagos filamentosos por microscopia de forca atomica e tunelamento.

• Processo: 96/00832-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 1996
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 1998
• Área de conhecimento: Ciências Exatas e da Terra - Química - Físico-química
• Pesquisador responsável: Luiz Alberto Colnago
• Beneficiário: Denise Osiro
• Instituição Sede: Instituto de Química de São Carlos (IQSC). Universidade de São Paulo (USP). São Carlos , SP, Brasil
• Assunto(s): Filmes ultrafinos Microscopia de força atômica Microscopia de tunelamento
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bacetriofagos | Filmes Ultrafinos | M 13 | Microscopia De Forca Atomica | Microscopia De Tunelamento | Self Assemble

Resumo

Os bacteriófagos filamentosos, principalmente o M13, fd, f1 são amplamente usados em biologia molecular como parte de protocolos de seqüenciamento de DNA, na geração de "probes" radioativos para hibridização, em mutações específicas de nucleotídeos "site direct mutagenesis" e mais recentemente como uma ferramenta para expressão de peptídeos ou proteínas exógenas em sua superfície que podem ser usados na geração de biblioteca de epitopos, vacinas, anticorpos, etc. Uma das dificuldades encontrada no estudo destes sistemas tem sido a determinação da estrutura tridimensional dos peptídeos ou proteínas fundidos na superfície do vírus. A estrutura desses bacteriófagos filamentosos tem sido estudado por vários métodos como microscopia eletrônica, difração de raios X e neutrons, RMN e outros. O microscópio eletrônico tem sido usado apenas para medir as dimensões desses vírus. As técnicas de RMN e raio X são as que apresentam maiores resultados na obtenção de informações da estrutura tridimensional desses vírus, porém tem suas aplicações restrita aos vírus selvagens ou mutantes que tem até seis aminoácidos inseridos na proteína principal. Neste trabalho pretende-se analisar a estrutura desses vírus com as microscopias de varredura de probes (SPM), tunelamento e força atômica. Estas técnicas tem como vantagens teórica: a possibilidade de resolução atômica/molecular de superfície das amostras; pode ser aplicada em até um único vírus; pode detectar proteínas expressas em baixa concentração como no caso de vírus híbridos, entre outras. Neste projeto pretende-se desenvolver metodologias simples e reprodutivas de fixação de amostras de bacteriófagos filamentosos em substrato sólido para a obtenção de imagens com microscopias de tunelamento e força atômica. Pretende-se caracterizar suas propriedades físico-química como cinética de absorção, força de retenção entre outros. Também pretende-se obter imagens dos vírus entrando ou saindo da bactéria hospedeira. (AU)