Distribuicao diferencial das isoformas da fosfolipase d na linhagem de mastocitos rbl-2h3.

• Processo: 02/05650-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2002
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2004
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
• Pesquisador responsável: Constance Oliver
• Beneficiário: Liliana Martos Nicoletti
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Fosfolipase D Citoesqueleto
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Celulas Rbl-2H3 | Citoesqueleto | Desgranulacao | Fosfolipase D | Microdominios Lipidicos

Resumo

A fosfolipase D (EC 3.1.4.4; PLD), é uma fosfodiesterase com atividade específica para fosfolipídeo que hidrolisa a fosfotidilcolina em ácido fosfatídico e colina. Estudos com a linhagem de mastócitos RBL-2H3 mostraram que a atividade da PLD é necessária para a secreção. A superfamília das PLDs é caracterizada por apresentar um motivo de consenso HKD (Histidina, Lisina, Ácido aspártico), presente nas duas cópias separadas de cada molécula da PLD. A clonagem dos genes de mamíferos levou a descoberta das isoformas PLD1 e PLD2 que diferem na sua expressão e função nos diversos tipos celulares. Os baixos níveis de expressão da PLD nas células têm dificultado ou até impossibilitado a sua detecção por imunocitoquímica e por Western blotting. No presente trabalho iremos estudar a localização intracelular das formas catalítica ativa e inativa das isoformas PLD1 e PLD2 na linhagem de mastócitos RBL-2H3 que foram transfectadas com genes para a PLD1 e PLD2 . Na construção das PLDs também foi utilizado um gene para a expressão de uma seqüência de oito aminoácidos denominada Flag®, a qual pode ser reconhecidos por um anticorpo anti-Flag. A distribuição e a possível translocação das isoformas PLD1-Flag® e PLD2-Flag®, será estudada em células estimuladas e não estimuladas a secretar. (AU)