Efeito de flavonoides na fosfoproteina tirosina fosfatase: mecanismos cineticos e relações estrutura-atividade

Autor(es)

Márcio André Miranda

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2000-08-22

Membros da banca

Hiroshi Aoyama; Jose Mauro Granjeiro; Satie Hatsushika Ogo

• Orientador: Hiroshi Aoyama

Resumo

Enzimas importantes em muitos sistemas celulares são inibidas ou ativadas por flavonóides. No entanto, não existe nenhum dado literário referente ao efeito dos flavonóides sobre as fosfoproteínas tiro sina fosfatase (PTP). Este trabalho propõe o estudo dos flavonóides sobre a atividade da fosfoproteína tirosina fosfatase de baixa massa molecular relativa (LMrPTP) de rim bovino relacionando a sua estrutura com o seu efeito sobre a atividade enzimática. A atividade enzimática foi determinada em pR 5,0 utilizando pnitrofenilfosfato (p-NPP), flavina mononuc1eotídio (FMN) e tirosina fosfato (Tyr-P) como substratos, a 37°C, por 20 minutos. Quercetina mostrou ser um ativador da enzima na concentração de 400 JlM, da ordem de 260,20 e 10% para p-NPP, FMN e Tyr-P respectivamente. Já a murina mostrou ser um excelente inibidor competitivo da atividade enzimática, com constantes de inibição da ordem de 58, 56,5 e 55 JlM/ L para p-NPP, FMN e Tyr-P respectivamente. Diferentemente do efeito ativador da quercetina, o efeito inibidor da murina foi dependente do pR. Estudos de estabilidade térmica na ausência e presença de agentes protetores ou redutores indicam que os flavonóides interagem com o sítio ativo mas não afetam as cisteínas. A interação entre a enzima e os flavonóides envolve fortemente um componente eletrostático, uma vez que na presença de NaCI houve a perda do efeito ativador da quercetina e a ativação por murina em concentrações superiores a 125mM. Para as mesmas condições, outros flavonóides foram testados, mas não apresentaram efeito significativos na atividade da LMrPTP, como a rotina e o kaempferol. Estes resultados sugerem a importância da posição dos grupos -aR dos flavonóides (nas posições 3' e 4' para a quercetina, 2' e 4' para a murina) para os distintos efeitos dos flavonóides. A ausência do grupo -aR na posição 3' (para o kaempferol) e a presença de um glicosídio (rotinose) no grupo -aR na posição 3 (para a rotina) promovem a supressão do efeito ativador do flavonóide sobre a atividade da enzima (AU)

• Processo FAPESP: 98/10148-3 - Efeito de flavonoides na atividade de fosfotirosina proteína fosfatase de baixa massa molecular no rim bovino
• Beneficiário: Márcio André Miranda
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado