Avaliação do sêmen refrigerado com ou sem plasma seminal e sua correlação com as proteínas do ejaculado de diferentes raças caninas

Autor(es)

Michelle Silva Araujo

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Botucatu. 2019-08-22.
• Instituição: Universidade Estadual Paulista (Unesp). Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia. Botucatu
• Data de defesa: 2018-12-03
• Orientador: Fabiana Ferreira de Souza

Resumo

O plasma seminal e suas proteínas influenciam a qualidade espermática do sêmen refrigerado e congelado em várias espécies, porém sua influência no sêmen refrigerado de cães ainda não está esclarecida. Ainda, diferenças interraciais na expressão de proteínas do plasma seminal que podem interferir na qualidade do sêmen canino não foram relatadas. O objetivo deste estudo foi verificar se a raça canina interfere na composição proteica do plasma seminal e das proteínas espermáticas e correlacioná-las com a refrigeração do sêmen canino na presença e ausência do plasma seminal. Desta maneira, dois experimentos foram realizados. No primeiro experimento as proteínas do plasma seminal e das células espermáticas de 4 raças caninas foram caracterizadas. O sêmen foi colhido, avaliado macro e microscopicamente. O plasma seminal e as células espermáticas foram separadas por centrifugação, refrigerados a 5 ºC e transportados ao laboratório para análise proteômica. Proteínas do plasma seminal e das células espermáticas foram digeridas, submetidas à espectrometria de massas, identificadas e caracterizadas quanto à ontologia gênica. A relação entre as proteínas encontradas e as raças caninas foi avaliada por análise multivariada. Foram encontradas 10 proteínas no plasma seminal e cinco proteínas espermáticas consideradas relevantes. Notou-se diferença na expressão de proteínas espermáticas e do plasma seminal de diferentes raças caninas. Para o segundo experimento, 3 pools do ejaculado de 8 cães, provenientes do experimento 1 foram utilizados. A morfologia, motilidade espermática computadorizada (CASA), espermatozoides íntegros e lesados (eosina / nigrosina), integridade de membranas plasmática e do acrossomo, produção de superóxido, produção de peróxido de hidrogênio, potencial mitocondrial, peroxidação lipídica, produção de espécies reativas ao oxigênio (técnica do ácido tiobarbitúrico induzido e espontâneo) e produção de enzimas antioxidantes (ELISA) foram avaliadas a cada 48 e 72 horas (M0, M48, M96 e M168) durante 168 horas (7 dias), em amostras de sêmen canino refrigeradas a 5 ºC com e sem plasma seminal. As amostras seminais foram divididas em dois grupos: sêmen diluído em TRIS-gema-glicose com plasma seminal e sêmen diluído em TRIS-gema glicose sem plasma seminal. Os dados obtidos foram analisados pelo two-way ANOVA e a análise multivariada pelo teste de Bonferroni. As amostras refrigeradas com plasma seminal apresentaram maior motilidade total, motilidade progressiva, velocidade média do trajeto, velocidade em linha reta, espermatozoides rápidos, índice de movimento espermático, espermatozoides com membranas plasmática e do acrossomo íntegras, maior potencial mitocondrial, menor movimento lateral de cabeça e menos espermatozoides médios e lentos. Com relação ao tempo de refrigeração, foi observada diferença estatística para a motilidade total, velocidade em linha reta, movimento lateral de cabeça, movimento retilíneo, linearidade, coeficiente de oscilação e índice de movimento. O perfil proteômico das proteínas espermáticas e do plasma seminal de quatro raças caninas foi descrito. Foi observada similaridade no padrão de expressão de proteínas espermáticas entre as raças Golden Retriever e Pastor de Maremmano Abruzzese, e entre as raças Dogue Alemão e Bernese. As raças Pastor de Maremmano Abruzzese, Dogue Alemão e Bernese apresentaram similaridade no padrão de expressão das proteínas do plasma seminal. O plasma seminal exerceu influência positiva sobre os parâmetros de motilidade e viabilidade espermática e função mitocondrial durante a refrigeração do sêmen a 5 ºC. (AU)

• Processo FAPESP: 17/02530-8 - Influência das proteínas do ejaculado de diferentes raças caninas sobre a qualidade e sobrevida dos espermatozóides refrigerados com ou sem plasma seminal
• Beneficiário: Michelle Silva Araujo Volpato
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado