Caracterização de um novo fator de colonização (FC O25) de Escherichia coli isoladas de colibacilose neonatal bovina

Autor(es)

Georgio Freesz Valadares

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2006-11-09

Membros da banca

Domingos da Silva Leite; Antonio Jose Piantino Ferreira; Sergio de Mendonça; Tomomasa Yano; Maria Silvia Viccari Gatti

• Orientador: Domingos da Silva Leite

Resumo

Infecções por Escherichia coli são freqüentes em animais domésticos, afetando principalmente animais recém nascidos e no período do pós-desmame, sendo responsáveis por importantes danos econômicos na suinocultura e pecuária de bovinos e ovinos. A instalação da bactéria ao hospedeiro se dá através da colonização, processo mediado por proteínas denominadas adesinas, que se encontram distribuídas por toda a superfície bacteriana. Estas apresentam uma grande variedade morfológica e são coletivamente chamadas de Fatores de Colonização (FCs). Neste trabalho identificamos um novo fator de colonização (FC O25) presente em cepas de Escherichia coli isoladas de casos de colibacilose neonatal bovina, que apresenta semelhanças antigênicas com os FCs F4(K88), CS31A e F41 sem, contudo, apresentar identidade genética com estes fatores em ensaios de PCR. Baseados nessas homologias, investigamos a hipótese do FC O25 pertencer a esta família de FCs. Estudamos a seqüência do gene que compõe a subunidade principal do FC O25 com base em semelhanças com genes dos fatores de colonização homólogos e encontramos o FC O25 presente em 35 das 41 cepas em estudo. Verificamos que a proteína FC O25 apresenta 49,7% de homologia com a proteína FaeG (F4), 35,4% com ClpG (CS31A) e 29,4% com FimF41. Com ferramentas de bioinformática determinamos a relação filogenética entre essas proteínas e a estrutura secundária do FC O25. Os estudos de extração de DNA genômico e plasmidial indicaram que o gene FC O25 deve estar localizado no cromossomo bacteriano. Este foi clonado no vetor de expressão pET-151, inserido na linhagem de E.coli BL21[DE3]-Star e a proteína do FC O25 foi obtida e purificada e antissoro policlonal monoespecífico foi obtido em coelho. A proteína do FC O25 purificada foi submetida a ensaios de Western Blotting frente a antissoros anti os FCs F4, F41 e CS31A e verificamos reconhecimento da proteína em diferentes graus. A cepa CG1905-B foi utilizada em ensaios de microscopia eletrônica de transmissão com marcação por anticorpos conjugados com ouro e verificamos que a estrutura do FC O25 é do tipo fibrilar assemelhando-se à estrutura do CS31A. Em ensaios de adesão a linhagens de células eucarióticas in vitro observamos adesão às células Caco-2 (carcinoma de cólon humano) e que esta adesão era inibida pelo antissoro anti-FC O25. Os resultados sugerem que o FC O25 pode ser importante para a patogenicidade das E. coli bovinas no Brasil, uma vez que encontramos uma associação deste com outros fatores de colonização e, sobretudo com toxinas relacionadas com a patogenia em bovinos, evidenciando novas relações entre mecanismos de virulência que merecem novas investigações, além da própria elucidação completa da estrutura do operon FC O25 (AU)

• Processo FAPESP: 00/01399-4 - Caracterização de um possível novo fator de colonização expresso por amostras de Escherichia coli isoladas de casos de colibacilose neonatal bovina
• Beneficiário: Geórgio Freesz Valadares
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado