Efeito da cell sheet de células-tronco da polpa dentária humana, associada ou não à terapia de fotobiomodulação, no reparo de lesões ósseas em calvárias de ratos portadores de Diabetes Mellitus

Autor(es)

Ana Clara Fagundes Pedroni

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Odontologia (FO/SDO)
• Data de defesa: 2020-05-27

Membros da banca

Marcia Martins Marques; Luciana Corrêa; Fernanda de Paula Eduardo; Maria Stella Nunes Araujo Moreira

• Orientador: Marcia Martins Marques

Resumo

Diabetes Mellitus (DM) é uma desordem metabólica que compromete a reparação óssea, demandando novas estratégias terapêuticas. Uma delas se baseia na aplicação da terapia celular por meio da utilização de cultivos do tipo \"Cell sheet\" (CS) - que preservam o contato célula-célula, a organização estrutural e o fenótipo das células-tronco (CTs). Outro tratamento alternativo é a terapia de fotobiomodulação (PBMT), que induz respostas que favorecem a regeneração tecidual. O objetivo deste estudo foi o de avaliar o efeito do uso de CSs de CTs da polpa dentária humana (hDPSC4) indiferenciada, associadas ou não à PBMT, no reparo de lesões ósseas em calvária de ratos diabéticos. O estudo contempla duas etapas: uma in vitro (obtenção e caracterização das CSs) e uma in vivo. Primeiramente, DM foi induzida em 54 ratos, pela administração de Estreptozotocina. Lesões ósseas foram realizadas nos ossos parietais de todos os animais. Essas lesões foram tratadas de acordo com os seis grupos experimentais (n = 6 por grupo/tempo experimental) - G.Controle: lesão sem tratamento; G.PBMT: lesão tratada com PBMT; G.MCol: colocação de membrana de colágeno suíno comercial; G.MCol+PBMT: colocação da membrana de colágeno suíno seguida da aplicação da PBMT; G.CS: colocação da CS e G.CS+PBMT: Colocação da CS seguida da PBMT. A PBMT foi realizada com laser infravermelho (808 nm, 40 mW, 0,028 cm2 de área do feixe, 1,4 W/cm2, 3 s, 4 J/cm2, 0,12 J por ponto) imediatamente, 48 e 96 horas após a cirurgia. Trinta e 60 dias após a cirurgia, as calotas cranianas foram dissecadas, fixadas e submetidas às análises de: Microtomografia Computadorizada (MicroCT), histologia (HE) e histoquímica (Tricrômico de Masson). Os dados foram tratados estatisticamente (p<=0,05). A CS de DPSC indiferenciada não acelerou o processo de reparo ósseo na maioria das lesões, ocorrendo abundante formação óssea em apenas dois animais do G.CS+PBMT em 60 dias. A MicroCT revelou, em 60 dias, aumento significativo no volume ósseo relativo (p=0,0064) e número de trabéculas (p=0,0068) no grupo G.MCol+PBMT e no volume ósseo relativo (p<0,0001) e espessura de trabéculas (p<0,0001) no grupo G.PBMT. Histologicamente, foi possível observar que a CS, em 30 dias, promoveu a formação de tecido osteóide organizado, rico em fibras colágenas e células osteoblásticas, com formação de ilhotas de neoformação óssea distantes dos bordos da lesão. No entanto essa neoformação foi considerada imatura, quando comparada aos outros grupos. Quando a CS foi associada ao PBMT foi possível observar mais fibras colágenas e maior frequência de ilhotas no centro da lesão. Nas condições experimentais dessa pesquisa, na maioria dos casos, a cell sheet (CS) de hDPSC4 indiferenciada não foi capaz de acelerar o processo de reparo de lesões ósseas críticas em calvária de ratos diabéticos. (AU)

• Processo FAPESP: 17/00760-6 - Efeito da cell sheet de células-tronco da polpa dentária humana, associada ou não à terapia de fotobiomodulação, na regeneração de lesões ósseas críticas em calvárias de ratos portadores de Diabetes Mellitus tipo 2
• Beneficiário: Ana Clara Fagundes Pedroni
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado