Potencial da terapia fotodinâmica antimicrobiana no desenvolvimento de resistência em Candida albicans

Autor(es)

Luana Mendonça Dias Santana

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Araraquara. 2020-05-26.
• Instituição: Universidade Estadual Paulista (Unesp). Faculdade de Odontologia. Araraquara
• Data de defesa: 2020-04-09
• Orientador: Ana Claudia Pavarina

Resumo

O fungo Candida albicans, em situações de desequilíbrio imunológico no hospedeiro, pode se tornar um patógeno oportunista e provocar infecções. Tendo em vista a resistência que os microrganismos desenvolveram a fármacos convencionais, a Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (aPDT) vem apresentando resultados promissores como uma terapia alternativa. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial que aPDT possuiu em desenvolver resistência, tolerância ou susceptibilidade em C. albicans em associação com o Photodithazine (PDZ- 25 µg/L; 660 nm; 18 J/cm2) e Curcumina (CUR- 40 µg/L; 455 nm; 18 J/cm2) plaqueados em meio sem e com suplementação de Fluconazol (8 µg/L). C. albicans (ATCC 90028) em culturas planctônicas e biofilme foram submetidas à aplicações sucessivas de aPDT (10 aplicações), como também, a ciclos de recuperação e re-cultivo das colônias que sobreviveram ao tratamento até o momento que não houvesse mais células viáveis para a recuperação e continuação das aplicações. O plaqueamento foi realizado em placas de Ágar Sabourand Dextrose suplementadas ou não com Fluconazol, e os valores das unidades formadoras de colônia por mililitro (UFC/mL) foram determinados. O teste de produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) foi realizado nos primeiros e últimos ciclos de aPDT. O perfil biomolecular das células sobrevivetes as aplicações 1, 4 e 7 de aPDT mediada por PDZ foi investigado através do teste de RT-qPCR. Foi observado no grupo tratamento de aPDT (P+L+) mediada por PDZ redução de aproximadamente 6,8 log10 em culturas planctônicas e aproximadamente 6,2 log10 em biofilme de C. albicans, em ambas metodologias utilizadas. No grupo tratamento de aPDT (C+L+) em associação com a CUR, foi observado um aumento da viabilidade em aproximadamente 1 log10 nos biofilmes de C. abicans. No grupo controle do experimento (P-L-), na metodologia de aplicações sucessivas, não foi observado diferença estatística entre as aplicações (p>0,05). Os resultados demonstraram menor viabilidade de culturas planctônicas e biofilmes de C. albicans cultivadas em placas com fluconazol, quando comparada as placas sem o antifúngico. As últimas sucessivas aplicações de aPDT mediada por PDZ produziram mais ERO, quando comparadas com a primeira aplicação. A aPDT superespressou o gene SOD1 e promoveu redução de expressão do gene CAP1 e ERG11. O tipo de cultura influencia na susceptibilidade à aPDT, pois foram necessárias quantidades distintas de aplicações para sua inativação. A aPDT foi potencializada pelo antifúngico fluconazol, independete do modelo e fotossensibilizador testado. C. albicans (ATCC 90028) em cultura planctônica e biofilme é susceptível à repetidas aplicações de aPDT mediada por PDZ, no entanto, quando mediada por CUR, os biofilmes apresentaram aumento de viabilidade após os ciclos. (AU)

• Processo FAPESP: 18/14874-6 - Potencial da terapia fotodinâmica antimicrobiana no desenvolvimento de resistência em Candida albicans
• Beneficiário: Luana Mendonça Dias Santana
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado