Probiótico: avaliação da atividade antimicrobiana in vitro e do efeito in vivo na progressão de lesões periapicais, por meio de análise microscópica

Autor(es)

Lisa Danielly Curcino Araujo

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Ribeirão Preto.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (PCARP/BC)
• Data de defesa: 2020-12-11

Membros da banca

Léa Assed Bezerra da Silva; Paulo Sérgio Cerri; Flavia Aparecida Chaves Furlaneto Messora; Paulo Nelson Filho

• Orientador: Léa Assed Bezerra da Silva

Resumo

Os probióticos são micro-organismos vivos que, quando administrados em quantidades adequadas, conferem benefícios à saúde do hospedeiro. Pesquisas em relação ao uso de probióticos para tratamento de doenças na cavidade bucal tem apresentado resultados relevantes. Entretanto, poucos estudos relatam o efeito do uso de probióticos nas infecções pulpares e nenhum estudo in vivo utilizou os probióticos como solução irrigadora de canais radiculares. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar, in vitro, a atividade antimicrobiana do probiótico Bifidobacterium animalis subsp. lactis HN019, por meio da técnica do poço, contra 10 micro-organismos podem ser encontrados envolvidos em infecções endodônticas. Além disso, foi avaliado in vivo, por meio da análise microscópica, o efeito desse probiótico quando utilizado como solução irrigadora de canais radiculares de dentes de ratos com lesões periapicais induzidas. Para a análise in vitro, foi feita a atividade antimicrobiana do probiótico sobre os Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus, Lacticaseibacillus casei, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Candida albicans, Porphyromonas gingivalis, Porphyromonas endodontalis, Prevotella intermedia e Fusobaterium nucleatum. Após 48 a 72 horas de incubação das placas de petri contendo meio de cultura, as cepas dos micro-organismos e o probiótico, as placas foram examinadas para avaliação da uniformidade do crescimento microbiano, presença de contaminantes e do halo de inibição. Após a inspeção visual, a leitura do halo de inibição foi realizada com auxílio de um paquímetro digital utilizando fonte de luz refletida para iluminar a placa invertida sobre um fundo preto e opaco após a remoção da tampa. Desse modo, foram obtidos 3 valores de cada inóculo bacteriano que foram somados e divididos por três para se obter a média dos valores. Já para a avaliação in vivo, os animais foram divididos em seis grupos de acordo com a solução irrigadora utilizada nos canais radiculares após abertura coronária e exposição do tecido pulpar, conforme segue: Grupo I (4 animais/ 8 dentes) dentes hígidos; Grupo II (4 animais/ 4 dentes): Hipoclorito de sódio à 2,5% como solução irrigadora (3 dias); Grupo III (4 animais/4 dentes): Probiótico como solução irrigadora (3 dias); Grupo IV (12 animais/ 24 dentes): Lesão periapical sem nenhum tratamento (7, 21 e 42 dias); Grupo V (12 animais/24 dentes): Hipoclorito de sódio à 2,5% como solução irrigadora (7, 21, 42 dias); Grupo VI (12 animais/24 dentes): Probiótico como solução irrigadora (7, 21, 42 dias). O probiótico Bifidobacterium animalis subsp. lactis (B. lacti) HN019 foi utilizado como solução irrigadora, formulada pela adição do probiótico a 2,7x 109 UFC em meio aquoso, acrescida de 2,0% de carboximetilcelulose, com um volume final de 100mµL. Para a administração local, os canais radiculares foram irrigados no dia 0 e dias 3, 7, 14, 21, 28 e 35 dias após a indução da lesão periapical. Após eutanásia dos animais, as mandíbulas foram submetidas ao processamento histotécnico, as lâminas coradas em hematoxilina e eosina (HE) e analisadas em microscópica óptica para descrição das características do conteúdo do canal radicular e das regiões apical e periapical, paralelamente à análise morfométrica da área das lesões periapicais, em microscopia fluorescente. Foi realizada, ainda, a contagem de osteoclastos, empregando a histoenzimologia para Atividade da Fosfatase Ácida Resistente ao Tartarato (TRAP). Os resultados obtidos foram submetidos à análise estatística por meio diferentes testes de acordo com a natureza dos dados. Para todas as análises foi adotado o nível de significância de 5%. Os resultados do estudo in vitro demonstraram que o probiótico B. animalis subsp. lactis HN019 promoveu a inibição de todas as cepas dos patógenos avaliados, com exceção do Candida albicans, demostrando atividade antimicrobiana sobre esses micro-organismos. Já os resultados do estudo in vivo da análise dos parâmetros histopatológicos demostraram que os grupos III e VI, com probiótico como solução irrigadora, apresentaram melhores resultados quando comparados ao grupo sem tratamento e com a irrigação de hipoclorito de sódio, mostrando menor quantidade de células inflamatórias e menor área da lesão. Em relação ao número de osteoclastos, foi observado diminuição apenas no grupo III, aos 3 dias (p=0,0425), e no grupo VI aos 21 dias (p=0,0043). Após as metodologias e os resultados obtidos, pode-se concluir que o probiótico Bifidobacterium animalis subsp. lactis HN019 apresentou in vitro atividade antimicrobiana contra micro-organismos presentes em infecções endodônticas, além de apresentar, microscopicamente, um potencial terapêutico para administração local como solução irrigadora na progressão da lesão periapical, quando comparado ao hipoclorito de sódio. (AU)

• Processo FAPESP: 18/22038-3 - Análise microscópica da gênese e progressão de lesões periapicais após o uso sistêmico e local de probiótico em ratos
• Beneficiário: Lisa Danielly Curcino Araujo
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado