Expressão diferencial de Xanthomonas axonopodis pv. citri na interação com Citrus sinensis utilizando eletroforese bidimensional de proteinas e cDNA RDA (Representational Difference Analysis)

Autor(es)

Angela Mehta

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Campinas, SP. , ilustrações, tabelas.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2002-12-09

Membros da banca

Yoko Bomura Rosato; Jörg Kobarg; Marilis do Valle Marques; Maria Helena Fungaro

• Orientador: Yoko Bomura Rosato
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética
• Indexada em: Base Acervus-UNICAMP; Biblioteca Digital da UNICAMP
• Localização: Universidade Estadual de Campinas. Biblioteca Central Cesar Lattes; M474e; Universidade Estadual de Campinas. Biblioteca do Instituto de Biologia; M474e

Resumo

No presente estudo, a expressão diferencial de X. axonopodis pv. citri em resposta a diferentes condições de cultura foi analisada através de eletroforese bidimensional (2-DE) de proteínas e cDNA RDA ("Representational Difference Analysis"). Para a análise de proteínas, a bactéria foi cultivada no meio basal MMl e na presença de extrato de folhas de urna planta suscetível (Citrus sinensis) assim como de urna resistente (Citrus reticulata) e urna não hospedeira (Passiflorae edulis). O perfil de proteínas revelou 12 "spots" diferenciais no tratamento com extrato de citros (hospedeiro suscetível) quando comparado àquele do MM 1. O perfil da bactéria cultivada em meio complexo NYG foi também analisado e a comparação com aquele do meio MM 1 revelou 36 proteínas diferenciais. Cinco proteínas dos diferentes tratamentos tiveram a região N-terrninal seqüenciada, incluindo 2 proteínas constitutivarnente expressas, 2 induzidas na presença de extrato de citros e 1 induzi da no meio complexo. Um método para a recuperação da bactéria de folhas da planta hospedeira foi também desenvolvido e validado através da análise de proteínas e RNA. O perfil de proteínas obtido através de 2-DE foi semelhante ao obtido pela bactéria cultivada na presença de extrato de folhas de Citrus sinensis. RNA total foi analisado através de eletroforese em gel de agarose e reações de RT -PCR utilizando primers para genes de X. axonopodis pv. citri confirmaram a qualidade do RNA obtido. O emprego desta técnica permitirá estudos de expressão in planta de diversas espécies de fitopatógenos. Com a técnica de cDNA RDA foram identificados cDNAs expressos na presença de extrato de folhas da planta hospedeira, assim como in vivo após hibridizações subtrativas contra cDNA da bactéria cultivada em MM1. Uma hibridização subtrativa de cDNAs da bactéria cultivada no meio NYG contra cDNAs expressos em MMl foi também efetuada. Um total de 37 genes distintos foi identificado através de busca de homologia no genoma de X. axonopodis pv. citri, incluindo genes que codificam proteínas hipotéticas (12), genes relacionados ao metabolismo (13), processos celulares (6) e patogenicidade (4), e elementos genéticos móveis (2) (AU)

• Processo FAPESP: 00/00733-8 - Analise da expressao diferencial de xanthomonas axonopodis pv.citri na interacao com citrus sinensis utilizando mapas 2-d e sage (serial analysis of gene expression).
• Beneficiário: Angela Mehta dos Reis
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado