Substituição do uso de soro fetal bovino na manutenção do cultivo de células CER infectadas pelo vírus da doença infecciosa da bursa de Fabrícius

Autor(es)

Ane Franciele Tapparo

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: São José do Rio Preto. 2014-06-11.
• Instituição: Universidade Estadual Paulista (Unesp). Instituto de Biociências Letras e Ciências Exatas. São José do Rio Preto
• Data de defesa: 2009-02-26
• Orientador: Tereza Cristina Cardoso

Resumo

Atualmente, as culturas celulares são consideradas uma das ferramentas mais importantes na virologia. Os meios de cultura utilizados na manutenção destes sistemas não oferecem capacidade às células de adsorver e se multiplicar em matrizes plásticas sem a adição suplementar de soro fetal bovino (SFB). Entretanto, o uso do SFB não é aconselhável devido às variações encontradas entre os lotes, o alto grau de proteína animal e a possibilidade da presença de agentes infecciosos. Além dos aspectos sanitários, existe o aspecto ético em relação à obtenção deste produto biológico. Com o aumento dos ensaios in vitro a quantidade estimada de produção de soro fetal bovino no mundo é de aproximadamente 500.000 litros/ano, isto significa, mais de 1.000.000 de fetos bovinos sacrificados para obtenção de SFB. O objetivo deste estudo foi cultivar as células CER (chicken embryo related) em diferentes meios de cultura: M-VSFM, 293- SFMII, VP-SFM, VP-SFM AGT, Glasgow, Leibovitz 15, adicionados de 2mg/ml ou 5mg/ml de IGF-1 (Insulin-like Growth Factor) e verificar a possibilidade das estirpes virais Lukert e Farangher de se adaptarem neste sistema. Nesta cultura a expressão da fibronectina e da laminina (LB1 e LB2) foram dectadas por imunofluorescência e imunoperoxidase indireta, respectivamente. As monocamadas de células CER foram infectadas pela estirpe Lukert e Farangher, sendo a m.o.i (multiplicidade de infecção) utilizada de 1.0. Após três passagens, o RNA viral foi extraído para determinar as substituições genéticas. A região hipervariável do gene VP2 foi amplificada por RT/PCR. Para confirmar as mutações, os produtos da PCR foram seqüênciados e comparados com as seqüências de VDIB publicadas no GenBank. Os resultados demonstraram que o meio VP-SFM e 5µg/mL de IGF-1 aplicado às culturas foi o melhor para a adaptação direta do cultivo das monocamadas... (AU)

• Processo FAPESP: 06/59312-8 - Alternativas para a substituicao do uso de soro fetal bovino na manutencao do cultivo de celulas cer infectadas pelo virus da doenca infecciosa da bursa de fabricius.
• Beneficiário: Ane Franciele Tapparo
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado