Análise funcional de peptídeos AtRALFs foliares e purificação por afinidade de proteínas que interagem com o AtRALF1 in planta

Autor(es)

Bianca Ribeiro

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Piracicaba.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALA/BC)
• Data de defesa: 2014-04-14

Membros da banca

Daniel Scherer de Moura; Maria Helena de Souza Goldman; Fabio Tebaldi Silveira Nogueira

• Orientador: Daniel Scherer de Moura

Resumo

Peptídeos sinais são moléculas envolvidas no crescimento, desenvolvimento e defesa de plantas. RALF (Rapid Alkalinization Factor) é um peptídeo sinal ubíquo no reino vegetal e que está envolvido com a expansão celular. Peptídeos RALF em Arabidopsis estão organizados em uma família multigênica de 37 membros, alguns com expressão tecido-específica, outros expressos em toda a planta. Este trabalho se insere dentro de um projeto maior que tem por objetivo esclarecer a função dos peptídeos RALF em plantas e determinar seu mecanismo de ação. Este trabalho teve dois objetivos específicos distintos. O primeiro consistiu em caracterizar as isoformas AtRALF19, AtRALF23, AtRALF31, AtRALF33 e AtRALF34 utilizando-se plantas mutantes, plantas superexpressoras e a análise dos promotores. O segundo objetivo específico foi identificar proteínas que interagem com o peptídeo AtRALF1 com o uso da técnica de purificação por afinidade em tandem (TAP) in planta. As análises fenotípicas das plantas transgênicas mostraram que plantas que superexpressam o gene que codifica o AtRALF33 apresentam fenótipo semi-anão, células foliares com área menor e com menor número de lóbulos. As plantas mutantes atralf33 e atralf23 apresentaram hastes e folhas maiores e células foliares com área maior. Plantas mutantes atralf34 não mostraram diferenças significativas quando comparadas com plantas selvagens e a análise do promotor do AtRALF34 mostrou uma expressão específica em estômatos, hipocótilo e ápice radicular. Com relação a purificação por afinidade, plantas mutantes mcca foram transformadas com a construção 35S:AtRALF1:HPB e usadas para obtenção dos extratos proteicos. (AU)

• Processo FAPESP: 12/21872-3 - Análise funcional dos peptídeos AtRALF31, 33 e 34 e busca de proteínas interagentes por intermédio da purificação por afinidade in planta
• Beneficiário: Bianca Ribeiro
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado