Avaliacao da liberacao de metaloproteinases da matriz (mmp-3, mmp-8 e mmp-9) em macrofagos ativados por endotoxinas e o envolvimento de citocinas neste processo.

Resumo

Endotoxinas (LPS) presentes nos canais radiculares infectados estimulam macrófagos a liberar diferentes citocinas, as quais podem modular a subseqüente produção de metaloproteinases da matriz (MMP) induzindo produção de reabsorção óssea periapical. Torna-se interessante, portanto, avaliar a relação entre LPS, citocinas e produção de MMPs in vitro em macrófagos. Assim, a proposta deste estudo será avaliar a capacidade de diferentes concentrações de endotoxinas (LPS) induzir a secreção de MMP-1, MMP-3 e MMP-8 em macrófagos, em variados períodos de tempo, e também verificar a influência de citocinas inflamatórias (IL-1a, IL-1b, TNF-a, PGE2) sobre a liberação de metaloproteinases em macrófagos estimulados por LPS, utilizando anticorpos específicos para cada citocina. Para tanto, macrófagos de camundongos da linhagem RAW 264.7 serão ativados com as seguintes concentrações de endotoxinas: 5, 10, 20 e 40 EU/ml. A produção de MMP-1, MMP-3 e MMP-8 será avaliada em três períodos de tempo (12, 24 e 48 horas) por ensaios imunoenzimáticos (ELISA). Após a determinação da concentração de LPS e tempo necessário para estimular a produção de MMP em macrófagos, as células serão ativadas com LPS na presença de anticorpos anti-IL-1a, anti-IL-1b, anti-TNF-a ou anti-PGE2. A produção de MMP-1, MMP-3 e MMP-8 nestas condições também será analisada por ELISA, a fim de verificar a participação destas citocinas na produção de MMP. (AU)