Transporte de íons em células renais e sua regulação

Resumo

Os projetos desta proposta têm em comum o estudo de transportadores e canais iônicos de membrana. Todos os projetos, a exceção de um, no qual são focados osteoclastos, tratam de células epiteliais renais. Estes projetos são dirigidos principalmente ao estudo de transportadores de H+ e K+, sejam os permutadores Na+/H+ (NHE1, NHE3) seja a H+-ATPase tipo vacuolar, bem como canais de potássio, particularmente ROMKe Maxi-K. Estes transportadores e canais serão estudados tanto em células dos diferentes segmentos de túbulos proximais, como em nefro distai, túbulo contorneado distai, segmento de conexão e duetos coletores. A interação entre a H+-ATPase e canais para CI- tipo CFTR e CLC5 será avaliada utilizando siRNA para silenciar a expressão desses canais em células de túbulos proximais. A interação entre o permutador Na+/H+ e o cotransportador Na+-Glicose será estudada em túbulos proximais de ratos normais e ratos diabéticos. Serão avaliados os efeitos crônicos da angiotensina II sobre a atividade, expressão e localização de NHEs e H+-ATPase, incluindo esclarecimento das vias de sinalização envolvidas nesses processos em diferentes tipos celulares. Além de angiotensina II, serão objeto de análise os efeitos da aldosterona, glicorcorticóides e peptídeo atrial natriurético. O papel das urogualinilinas, angiotensina II e prostaglandina E2 sobre a secreção de H+ e K+ em túbulos renais serão avaliados utilizando técnica de microperfusão tubular. Métodos de investigação empregados nos projetos apresentados: Medidas de concentração de prótons e potássio em fluido tubular utilizando eletrodos com resinas seletivas, em animais "in vivo", por técnica de micropunção de túbulos renais; medidas de concentração intracelular de protons e cálcio com a utilização de sondas fluorescentes em túbulos renais isolados e em linhagens de células imortalizadas em cultura, em microscópio de fluorescência e/ou confocal. Métodos de biologia molecular para expressão e análise de proteínas, silenciamento gênico com siRNA, Northern-, Southern- e Western-blots, imuno-blots, biotinilação de proteínas. (AU)