Papel do colesterol na criotolerância e viabilidade de embriões bovinos produzidos in vitro com diferentes cinéticas de desenvolvimento.

Resumo

Embriões com quantidades elevadas de lipídeos têm seu desenvolvimento prejudicado, com aumento da morte embrionária e menor sobrevivência após criopreservação. Além disso, o conteúdo lipídico está relacionado com menor taxa de prenhez e baixo sucesso a criopreservação dos embriões PIV, quando comparados com embriões produzidos in vivo. Um componente que está presente tanto nas gotas lipídicas quanto nas membranas é o colesterol, que tem sido apontado pelos estudos recentes como um importante lipídeo a ser investigado mais intensamente, após terem demonstrado diferenças nas quantidades de transcritos de genes relacionados a essa via em embriões cultivados na presença e ausência de soro, bem como em embriões com cinéticas diferentes quando comparados aos produzidos in vivo. Diante disso, esse projeto tem como objetivo investigar o papel do colesterol em embriões bovinos de diferentes cinéticas de desenvolvimento, bem como a sua influência sobre a criopreservação e demais variáveis de viabilidade embrionária. Para isso, embriões bovinos serão produzidos in vitro em meio de cultivo suplementado com drogas inibidora (simvastatina) de e estimuladora (IGF- 1) da biossíntese do colesterol. Os embriões serão classificados quanto a cinética de desenvolvimento as 40hpi, coletados no estágio de blastocisto e avaliados quanto: a quantidade das gotas lipídicas (Nile Red), ao perfil de colesterol (espectrometria de massas), a quantificação de transcritos relacionados a via de síntese do colesterol (RT-PCR), a indução de apoptose (Caspase/ TUNEL), imunolocalização de proteínas chave na via de colesterol e criopreservação. (AU)