Sandwich ELISA com duplo anticorpo baseado no circovirus suíno tipo 2 (PCV2) produzido em cultivo celular para detecção de anticorpos

Autor(es)

Taís F. Cruz ; Tatiana M. Kanashiro ^[2] ; Alessandra M.M.G. de Castro ^[3] ; Cintia M. Baldin ^[4] ; Leonardo J. Richtzenhain ^[5] ; João P. Araujo Jr

• Tipo de documento: Artigo Científico
• Fonte: Pesquisa Veterinária Brasileira; v. 36, n. 12, p. 1171-1177, 2016-12-00.

Resumo

RESUMO: Há poucos relatos na literatura de métodos de ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay), para a detecção de anticorpos contra o circovírus suíno tipo 2 (PCV2), baseados em antígenos produzidos em cultivo celular, bem como uma escassez de trabalhos descrevendo técnicas de purificação viral para os membros da família Circoviridae. Isso ocorre, pois os circovírus são de difícil isolamento, não causam efeito citopático e produzem um baixo título viral em cultivo celular. Assim, para superar essas dificuldades encontradas no cultivo do PCV2, este estudo objetivou desenvolver um sandwich ELISA com duplo anticorpo, baseado no antígeno de PCV2 produzido em cultivo celular, para a quantificação de anticorpos anti-PCV2. Um colchão de sacarose descontínuo a 20% e 50% foi utilizado para a purificação viral, o qual possibilitou a separação das proteínas oriundas do cultivo celular no colchão de sacarose a 20% e uma maior concentração viral no colchão de sacarose a 50%. Com a ultracentrifugação isopícnica, o PCV2 ficou mais concentrado na banda com valores de densidade de 1,330 a 1,395g/cm3. A purificação viral foi avaliada pelas técnicas de SDS-PAGE, ELISA indireto e microscopia eletrônica. Assim, o método de ELISA padronizado revelou uma forte correlação linear (r = 0,826, p <0,001) quando comparado com um kit de ELISA comercial. O ensaio demonstrou baixa variabilidade (coeficientes de variação inter-teste de 4,24% e intra-teste de 1,80%) e uma excelente especificidade analítica conferida pelo anticorpo de captura produzido em coelho. Portanto, o método de ELISA demonstrou ser rápido, específico e conveniente para a detecção de anticorpos contra o PCV2 em estudos de infecção natural e experimental, além da monitoria da resposta à vacinação contra o PCV2 em granjas comerciais. (AU)

• Processo FAPESP: 06/57976-6 - Expressao em fagos ("phage display") de anticorpos monoclonais contra o circovirus suino tipo 2 para aplicacao em tecnicas sorologicas (elisa - "enzyme linked immnunosorbent assay" - e imunoperoxise).
• Beneficiário: Taís Fukuta da Cruz
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Processo FAPESP: 06/59002-9 - Expressão em fagos (phage display) de anticorpos monoclonais contra o Circovirus Suino tipo 2 para aplicação em técnicas sorológicas (ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay e imunoperoxidase)
• Beneficiário: João Pessoa Araújo Junior
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular