Avaliação da diversidade genética de cianobactérias de manguezais do estado de São Paulo usando DGGE e biblioteca do gene DNAr 16S

Resumo

Este projeto de pesquisa tem como objetivo avaliar a diversidade de cianobactérias em ecossistemas de manguezal, bem como, verificar possíveis alterações na população deste microrganismo em ambiente impactado por derramamento de petróleo contrastando com outro não impactado. Para tanto, serão utilizadas ferramentas moleculares, como DGGE e biblioteca do gene de DNAr 16S. Serão coletados solos de manguezais situados no Estado de São Paulo (Cananéia-Ilha do Cardoso e Bertioga), o DNA total será extraído, o gene de DNAr 16S será amplificado com iniciadores específicos para cianobactérias, e o produto será analisado usando a metodologia do DGGE. Os amplicons resultantes serão excisados do gel e sequenciados. A identificação das cianobactérias será feita por meio da comparação das sequências obtidas na análise BLAST (NCBI). As relações entre essas sequências serão estudadas por meio da construção de árvores filogenéticas. A biblioteca do gene de DNAr 16S será construída a partir da amplificação por PCR do DNA total do solo e o produto será clonado em Escherichia coli. Os insertos contidos nos plasmídeos serão amplificados por PCR e sequenciados. As análises serão efetuadas da mesma maneira que para o DGGE. Informações a respeito da diversidade de cianobactérias presentes em ecossistemas de manguezal brasileiros são praticamente inexistentes e este projeto irá gerar conhecimentos sobre a distribuição deste grupo de bactérias tão importante para esse ambiente. (AU)