Validação funcional de potenciais enhancers de glândula anelar identificados no genoma de Drosophila melanogaster

Resumo

"Enhancers" constituem a maior classe de elementos de DNA com função reguladora, cuja função é especificar os níveis de RNAm a serem transcritos e ditar padrões espaciais e temporais de regulação de expressão dos genes aos quais estão associados. Recentemente, nosso grupo caracterizou funcionalmente dois "enhancers" na região promotora do gene de pufe de DNA BhC4-1. O "enhancer" de 129 pb (-186/-58) regula a expressão de BhC4-1 em glândulas salivares de prépupas e o "enhancer" de 67 pb (-253/-187) regula a expressão do gene a partir do final da embriogênese na glândula anelar, órgão endócrino responsável pela síntese de esteróides. Até onde é de nosso conhecimento, o "enhancer" de glândula anelar é único, no sentido que não foram identificados em Drosophila melanogaster elementos cis-reguladores que promovem transcrição exclusivamente na glândula anelar, a partir do final da embriogênese. Uma análise bioinformática identificou 67 sequências únicas de D. melanogaster que são similares a diferentes regiões do "enhancer" de glândula anelar e cuja maioria está localizada em regiões reguladoras ou em íntrons. O objetivo do presente projeto é validar duas das sequências similares ao "enhancer" de glândula anelar, identificadas através da análise bioinformática, quanto à sua capacidade em regular a expressão neste tecido, quando testadas à montante de um gene repórter em linhagens transgênicas de D. melanogaster. A demonstração de que os fragmentos testados são capazes de regular a expressão do gene repórter na glândula anelar de transgênicos confirmará que os fragmentos identificados pela análise bioinformática são relevantes do ponto de vista funcional e contribuirá para o entendimento de mecanismos reguladores de expressão gênica no mais importante órgão endócrino larval. (AU)