Genotipagem de amostras de Toxoplasma gondii isoladas de avestruzes (Struthio camelus) de abatedouros, e de criatórios comerciais no Estado de São Paulo

Resumo

O Toxoplasma gondii é um parasita de grande importância no contexto de produção animal e saúde pública, envolvendo alterações fetais e abortos na espécie humana e em animais, sendo também um importante patógeno oportunista em pacientes imunocomprometidos. Possui uma estrutura populacional com linhagens predominante tipo I, II e III. A transmissão do parasita por alimentos tem sido caracterizada como de alto risco à saúde humana. A comercialização e consumo mundial de produtos cárneos derivados de avestruzes têm apresentado grande aumento, porém com poucos estudos com relação à toxoplasmose, representando um risco potencial de infecção pelos alimentos para o homem. Deste modo, serão colhidas terra e fezes de gatos três vezes ao ano, no total de um ano, nos criatórios comerciais que fornecem animais para abate nos abatedouros de Laranjal Paulista e Boituva-SP. Nos abatedouros serão colhidas amostras de sangue dos mesmos animais, cérebro, diafragma e coração dos mesmos avestruzes destinados ao abate. Após a dessora, as amostras de soro serão submetidas às provas sorológicas de aglutinação direta modificada, com antígeno inativado pelo metanol (MAT-AM) ou formalina (MAT-AF), para diferenciar os estágios da infecção toxoplásmica, e à reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para a pesquisa de IgM e IgG. As amostras teciduais dos animais soropositivos serão maceradas e submetidas à digestão pela pepsina, e realizado bioensaio em camundongos para o isolamento do parasita. A pesquisa de oocistos na terra será realizada pelo método de centrífugo-flutuação em solução de flutuação de açúcar de Sheater. Será realizada a genotipagem das amostras isoladas dos avestruzes, fezes de gatos e do solo, pela multiplex-PCR, nested-PCR e análise do polimorfismo de fragmentos de restrição (RFLP-PCR) em 12 loci (SAG1, 5'-3'SAG2, aSAG2, SAG3, BTUb, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico e CS3), além da associação da virulência obtida no bioensaio com os perfis obtidos nos marcadores ROP18Del e ROP18UPS. Os resultados da genotipagem serão analisados para determinação da filogenia no programa SplitsTree. Desta forma, pretende-se isolar T. gondii de tecidos de avestruzes abatidos para o consumo humano, e em terra e fezes de gatos dos criatórios comerciais; detectar a fase da infecção no momento de abate, pela comparação de provas sorológicas; comparar os perfis de genotipagem obtidos na RFLP-PCR para 12 marcadores genéticos e realizar a análise filogenética dos isolados para determinar o relacionamento filogenético entre estes.