Marcação de Spin Sítio Dirigida e Ressonância Magnética Eletrônica: Uma nova abordagem para o estudo de interações membrana-proteína e proteína-proteína

Resumo

No presente projeto é proposto o estudo da proteína ligante de ácidos graxos de cérebro humano (B-FABP) e da enzima clorocatecol 1,2-dioxigenase (CCD) de Pseudomonas putida através, principalmente, de uma metodologia que faz uso da técnica de Ressonância Magnética Eletrônica (RME) e da marcação de spin sítio dirigida. B-FABP faz parte de uma família de proteínas citosólicas de baixo peso molecular, capazes de ligar ácidos graxos reversivelmente. B-FABP difere das outras proteínas de sua família por ser capaz de ligar ácidos graxos poliinsaturados de cadeia longa com alta afinidade, especialmente o ácido docosahexanóico (DHA), presente principalmente na membrana plasmática de células do tecido nervoso. Neste projeto, é proposto o estudo da interação entre B-FABP e ácidos graxos de cadeia longa, além do estudo da interação da proteína com vesículas fosfolipídicas, com o objetivo de se chegar a um melhor entendimento a respeito das mudanças conformacionais ocorridas com a ligação de ácidos graxos e interação com sistemas modelo. Em relação à enzima CCD, sua função biológica justifica o interesse pelo seu estudo: a clivagem de hidrocarbonetos sintéticos aromáticos continuamente liberados pela indústria moderna. Recentemente, quando da determinação da primeira estrutura tridimensional de uma dioxigenase intradiol da família da catecol dioxigenase, foi observada a existência de um canal hidrofóbico para ligação de fosfolipídios na estrutura da CCD. Este fato trouxe à tona uma série de perguntas a respeito dessa família de enzimas e que buscam investigar o porquê de uma possível interação dessa proteína com membranas biológicas ou com surfactantes. Assim, propomos abordar esses dois problemas através do uso conjunto de técnicas de DNA recombinante (marcação de spin sítio dirigida) e espectrocópicas, com ênfase na RME e dicroísmo circular.