Estabelecimento e caracterização de células pulpares imortalizadas pelo antígeno do vírus Simian 40 (SV40 T-Ag) e análise de citotoxidade e genotoxicidade de cimentos endodônticos.

Resumo

A limitação da investigação de células derivadas da polpa em relação ao metabolismo celular, regulação de genes e resposta biológica a exposição de materiais dentários pode ser explicada pelo uso de células primárias como linhagem celular. Estas células possuem uma capacidade de divisão limitada e logo alcançam o estado não-proliferativo chamado senescência. Para minimizar este problema, as células primárias derivadas da polpa humana serão estabelecidas e imortalizadas com o antígeno do vírus Simian 40 (SV40 T-Ag). As células serão analisadas por reação em cadeia da polimerase (PCR) e imunohistoquímica. Os experimentos serão realizados para caracterizar as células imortalizadas em relação às células primárias. Assim, após a imortalização, a morfologia celular e proliferação celular serão analisadas por ensaio de MTT e a expressão de genes e proteínas específicas (incluindo colágeno tipo I e II, fosfatase alcalina, osteocalcina, sialoproteína óssea, matriz dentinária protéica, BMP-2 e BMP-4) será detectada por transcrição reversa - reação em cadeia de polimerase (RT-PCR) e imunohistoquímica. Ainda a análise de possíveis alterações no DNA das células primárias e imortalizadas será realizada pelo ensaio de micronúcleos. Após o desenvolvimento de uma linhagem celular imortalizada, será analisado a citotoxicidade e genotoxicidade de cimentos endodônticos (Apexit Plus, AH Plus, Real Seal e um cimento experimental derivado do óleo da Copaíba). Os espécimes dos cimentos serão mixados, deixados por 24 h em estufa (5% CO2, 37°C a 100% umidade) e colocados em meio de cultura (91,6 mm2 superfície /ml) por 24h em 37°C. As células imortalizadas serão expostas as diluições dos cimentos por 24 h, e a sobrevivência celular será mensurada pelo teste de MTT em espectrofotômetro. A genotoxicidade será determinada pela formação de micronúcleos em células imortalizadas após 24h de exposição aos cimentos e ao etilmetano sulfanato (controle positivo). As diferenças entre a taxa de sobrevivência celular e número de micronúcleos serão estatisticamente analisadas pelo teste de Mann-Whitney-U (p<0,05). (AU)