Influência da sexagem de espermatozóide bovino por citometria de fluxo em diferentes variáveis espermáticas e embrionárias

Resumo

O objetivo deste estudo é comparar diferentes características espermáticas entre sêmen sexado e não sexado e embriões produzidos com este sêmen. Serão utilizadas amostras de sêmen de quatro touros. Um ejaculado de cada touro será colhido e fracionado em três partes: não sexado (NS), sexado contendo espermatozoide X (SX) e sexado Y (SY). Para avaliação morfométrica da cabeça do espermatozoide serão feitas 100 imagens de células por amostra de todos os touros/tratamento através de microscopia de força atômica. As imagens serão avaliadas quanto ao volume, área, diâmetro máximo e rugosidade de membrana utilizando o software SPM Off-line. Padrão de metilação do DNA será avaliado na região diferencialmente metilada (DMR) do gene IGF2. Todo o procedimento será repetido três vezes. Embriões produzidos in vitro com este sêmen dos três tratamentos serão utilizados para avaliação do padrão de metilação e expressão gênica. Seis pools de 15 embriões de cada grupo serão formados. Destes pools, três serão utilizados para avaliação da expressão dos genes PLAC-8, KRT-8, Interferon-tau, MnSOD, Hsp-70, DNMT 3A, DNMT 3B, DNMT 1, Glucose Transporter (GLUT) 1, 2 e 3 por PCR em tempo real. Os três pools restantes serão utilizados para avaliação do padrão de metilação da DMR do gene IGF2 semelhante ao citado anteriormente. Além disto, será realizada a comparação entre os grupos quanto à capacidade de ligação dos espermatozóides sexados e não sexados com as células da tuba uterina, também realizada em três diferentes repetições. O tempo de viabilidade do espermatozoide SX, SY e NS em meio de fecundação também será avaliado. (AU)