Padronização de métodos voltamétricos para medidas da concentração de GSH e resíduos de cisteína de proteínas em hemácias e plasma

Resumo

Neste trabalho pretende-se padronizar dois métodos voltamétricos para medir a concentração de glutationa reduzida e resíduos de cisteína das proteínas e sua relação com a capacidade antioxidante de fluidos biológicos. Visa contribuir para o estabelecimento de métodos analíticos eficientes para avaliar alterações na capacidade antioxidante e conseqüentemente para o diagnóstico e acompanhamento do tratamento de patologias e de processos fisiológicos nos quais o estresse oxidativo é fator relevante. Os métodos voltamétricos são muito interessantes porque permitem respostas rápidas; a utilização de pequenas quantidades de amostra e nenhum reagente adicional. No primeiro método será usado como eletrodo de trabalho um eletrodo de gota de mercúrio: o eletrodo Ag/AgCl/KCl (3 mol.L-1) como referência, e como contra-eletrodo um fio de platina. No segundo método o eletrodo de trabalho será um eletrodo de filme de bismuto. Estes eletrodos de trabalho foram escolhidos por permitirem a varredura de potenciais negativos (-1 a 0 V). Serão utilizadas como amostras soluções de biomoléculas de complexidade crescente. Primeiramente serão usadas soluções de glutationa reduzida (1 a 10.10-6 mol.L-1) e de albumina de soro bovino (1 a 40 mg/mL), na presença e ausência da adição de oxidantes. Em seguida serão utilizados: plasma humano e papa de hemácias humanas não tratadas e previamente submetidas ao agente oxidante diamida. Como métodos comparativos serão utilizados dosagem de grupamentos sulfidrila totais, TBARS e FRAP. (AU)