Amplificação do genoma mitocondrial completo de espécies da sub-ordem Brachycera (Diptera: Hexapoda) por PCR de longa extensão: perspectivas para a filogenia molecular

Resumo

A ordem Diptera representa cerca de 12% da diversidade animal descrita. Dentre as questões controversas sobre a filogenia de dípteros, uma das mais intrigantes reside nas relações de Schizophora, um clado da sub-ordem Brachycera que inclui dípteros muscóideos, consistindo na maior radiação de insetos do período Terciário. Até o momento, estudos moleculares não endereçaram apropriadamente as relações evolutivas dos subgrupos de Brachycera. Inserido em um estudo mais amplo, este projeto tem como objetivo padronizar e otimizar reações de PCR de longa extensão (long-PCR) do DNA mitocondrial (mtDNA) para uma ampla diversidade de dípteros muscóideos. Através do long-PCR pretende-se amplificar o genoma mitocondrial completo em poucos amplicons, associando, futuramente, esta técnica ao pirosequenciamento em plataforma 454. Esta abordagem pode colaborar para o futuro da mitogenômica de insetos em grande escala. Em primeira instância, pretende-se criar um banco de mtDNA para espécies de dípteros, permitindo a associação da informação genética a dados morfológicos, ecológicos e geográficos de amostras coletadas e espécimes preservados em coleções entomológicas. Futuramente, como continuidade deste projeto, as sequências completas obtidas serão empregadas na filogenia e evolução molecular, permitindo a análise dos genes mitocondriais num contexto comparativo amplo. Propõe-se, ainda, a amplificação por PCR convencional e sequenciamento da subunidade mitocondrial 16S do rRNA (rrnl) de amostras de Brachycera selecionadas, visando a caracterização deste marcador para análises de divergências antigas em Diptera. (AU)