Efeito direto e transdentinário do LED infravermelho sobre células-tronco da polpa dentária humana in vitro e sobre o complexo dentino-pulpar in vivo

Resumo

Pesquisas in vivo demonstraram que a fototerapia provoca um estímulo na síntese de matriz dentinária por odontoblastos e diminui a intensidade na reação inflamatória pulpar. Dentre as diferentes fontes de luz, aquela gerada por diodos emissores de luz (LED) tem sido amplamente estudada, sendo que diversos efeitos positivos em relação ao reparo tecidual já foram relatados. Entretanto, o mecanismo que rege o processo do reparo pulpar pela luz permanece desconhecido. Assim, o objetivo da presente pesquisa será avaliar o efeito do LED 850 nm, em parâmetros específicos, sobre células-tronco da polpa dentária in vitro e sobre o tecido pulpar in vivo. Para o experimento laboratorial, serão utilizadas células-tronco originárias da polpa de dentes humanos hígidos, as quais serão cultivadas em placas de acrílico e/ou sobre a superfície pulpar de discos de dentina com 0,2 mm de espessura (n=102) montados em dispositivos metálicos desenvolvidos para esta finalidade. O LED será aplicado diretamente sobre as células e/ou sobre a superfície oclusal dos discos de dentina (ação transdentinária). Para avaliação do metabolismo celular, formação de nódulos mineralizados, número de células viáveis, proteína total e fosfatase alcalina serão realizados os ensaios de MTT, Alizarin Red, Trypan Blue, Read Northcote e Kit de Fosfatase Alcalina (ALP), respectivamente. Além disso, será realizado o ensaio q-PCR para avaliação da expressão dos genes que codificam para colágeno tipo I, sialoproteína da dentina (DSPP), ALP, proteína da matriz dentinária (DMP-1) e OCT-4. As células tratadas através da interposição do disco de dentina serão submetidas às mesmas avaliações. Para o estudo in vivo, cavidades de classe I (n=150) serão confeccionadas na superfície proximal de primeiros molares superiores de ratos (n=60), com a presença ou não de exposição pulpar. As cavidades serão irradiadas com o melhor parâmetro do LED determinado pelo protocolo in vitro, e então submetidas ao capeamento pulpar direto com hidróxido de cálcio (para o grupo com exposição pulpar) e/ou restauradas com cimento de ionômero de vidro (CIV). Após 7, 15 ou 30 dias, os animais serão sacrificados, sendo que os dentes serão processados para análise histológica e imunohistoquímica da resposta do complexo dentino-pulpar à fototerapia proposta. Testes estatísticos serão selecionados em função do tipo de variável resposta e das características do conjunto de dados de cada uma delas. As inferências estatísticas serão baseadas no nível de significância de 5%.