Papel da relaxina em diferentes fases do desenvolvimento de células de Sertoli: caracterização da sinalização intracelular, efeitos sobre a expressão gênica e proteica e modulação por FSH

Resumo

A fertilidade masculina é regulada por uma combinação de sinais hormonais que controlam a produção, pelas células de Sertoli, de fatores necessários para a espermatogênese. FSH e testosterona exercem um papel fundamental para a espermatogênese. Esses hormônios, na dependência do estágio de maturação das células de Sertoli, podem ativar vias de sinalização como AMPc/PKA, ERK1/2 ou PI3K/AKT. Membros das cascatas PI3K/AKT e AMPc podem ativar o fator de transcrição CREB que, em células de Sertoli, é particularmente importante para manutenção da espermatogênese. Os níveis de CREB são altos em células de Sertoli durante os oito primeiros estágios da espermatogênese, sugerindo um papel importante nas células germinativas haplóides. CREB é também responsável pela regulação de genes importantes para a espermatogênese entre eles aromatase e inibina. Além de testosterona e FSH, diversos outros fatores podem contribuir para a regulação da espermatogênese. Verificamos, recentemente, que relaxina, um membro da família de peptídeos semelhantes a insulina, está presente no testículo. Relaxina estimula a proliferação de células de Sertoli imaturas por um mecanismo dependente da ativação de PI3K e ERK1/2. O objetivo do presente projeto é caracterizar as vias de sinalização e a expressão gênica e protéica relacionada com ciclo celular e diferenciação, estimuladas por relaxina em células de Sertoli em dois estágios diferentes: imaturas (15 dias) e em diferenciação (20 dias). Para isso, avaliaremos especificamente: 1) o efeito de relaxina, na ausência ou na presença de FSH, sobre as vias AMPc-PKA/Epac, MEK-ERK1/2, PI3K-AKT, e sobre a ativação do fator de transcrição CREB. 2) a modulação, por relaxina, da expressão gênica relacionada a ciclo celular por PCR-array, validando esses dados por PCR quantitativo, imunohistoquímica ou Western blot. 3) o efeito de relaxina, na ausência ou na presença de FSH, sobre a expressão de alguns genes importantes para a espermatogênese, entre eles aromatase, receptor de andrógeno, inibinas A e B e caderinas 1 e 2.