Atuação da ocitocina no processo de diferenciação osteoblástica em ratas senis

Resumo

Estudo realizado em nosso laboratório evidenciou que a ocitocina promoveu maior formação e inibiu reabsorção óssea alveolar em ratas com 24 meses quando comparado com o grupo de mesma idade que não recebeu o hormônio. Entretanto, nas ratas de 12 meses o tratamento com ocitocina não desencadeou alteração significativa no processo de regeneração óssea. Mediante estes resultados, questionamos se os osteoblastos de ratas com diferentes idades são capazes de manter a capacidade de sintetizar ocitocina e de responder ao seu estímulo, bem como se existe via autócrina entre osteoblastos e ocitocina. Portanto, torna-se importante a investigação dos mecanismos celulares envolvidos na formação óssea em resposta a ocitocina, visando à compreensão dos mecanismos envolvidos na maior formação óssea em organismos senis, em período caracterizado pela aciclicidade estral (estropausa - 24 meses) comparado com organismos adultos com ciclo estral regular (12 meses). Neste estudo será avaliada a influência da idade e a ação da ocitocina associado a indutores osteogênicos clássicos durante a diferenciação em linhagem osteogênica de células-tronco da medula óssea de ratas Wistar com 12 e 24 meses de idade. As células- tronco mesenquimais coletadas irão constituir os seguintes grupos de estudo: 1 = Controle/12 meses (meio de proliferação); 2 = Controle + Ocitocina/12 meses (meio de proliferação + ocitocina); 3 = Meio osteogênico/12 meses (ácidos ascórbico + beta-glicerofosfato + dexametasona); 4 = Meio osteogênico + Ocitocina/12 meses (ácidos ascórbico + beta-glicerofosfato + dexametasona + ocitocina); 5 = Controle/24 meses (meio de proliferação); 6 = Controle + Ocitocina/24 meses (meio de proliferação + ocitocina); 7= Meio osteogênico/24 meses (ácidos ascórbico + beta-glicerofosfato + dexametasona) e 8 = Meio osteogênico + Ocitocina/24 meses (ácidos ascórbico + beta-glicerofosfato + dexametasona + ocitocina). Serão realizadas análises de proliferação celular, mensuração da atividade de fosfatase alcalina, detecção e quantificação da mineralização da matriz extracelular, expressão gênica da ocitocina, do receptor de ocitocina (OTR) e proteínas de matriz colágenas e não-colágenas em cultura de osteoblastos (Extração e quantificação do RNA total e transcrição reversa; PCR quantitativo) e, por ELISA será determinado a concentração de prostaglandinas E2.