Efeito da crotoxina sobre a funcionalidade de neutrófilos diferenciados in vitro a partir de progenitores mielóides

Resumo

Em estudo recente demonstramos que a crotoxina (CTX) inibe in vitro e in vivo o processo de fagocitose por neutrófilos, sendo o efeito in vivo prolongado, uma vez que o mesmo pode ser observado até 14 dias após a administração subcutânea de uma única dose de CTX. Ainda, demonstramos que esse efeito está associado à diminuição da fosforilação de resíduos de tirosina em proteínas sinalizadoras e ao comprometimento da reorganização adequada do citoesqueleto da célula. Considerando a vida média curta dos neutrófilos e a rápida eliminação da CTX após a sua administração, é difícil explicar essa ação inibitória prolongada. Nesse sentido, dados preliminares mostram que a CTX inibe a fagocitose por neutrófilos maduros obtidos da medula óssea 14 dias após a administração subcutânea da toxina. Uma possível hipótese para explicar sua ação prolongada seria o fato de que essa toxina poderia alterar a funcionalidade dos neutrófilos durante o seu processo de maturação. Assim, dando continuidade a essa linha de pesquisa, o objetivo desse projeto é investigar o efeito da CTX sobre a atividade funcional dos neutrófilos diferenciados in vitro a partir dos seus progenitores mieloides. Para tanto, estes progenitores serão isolados da medula óssea de animais pré-tratados com CTX e após a sua diferenciação, in vitro, em células maduras, serão avaliados os seguintes parâmetros: a) transmigração em células endoteliais t.End.1; b) adesão celular a proteínas de matriz extracelular; c) fagocitose de partículas de zimosan opsonizadas com C3bi; d) expressão da molécula do receptor CR3 (CD11b/CD18) e) expressão de moléculas sinalizadoras, tais como, fosfotirosina, pSyk, pVav1, RhoA, Rac1, Cdc42 e Arp 2/3. Esse estudo contribuirá para elucidação dos mecanismos envolvidos na ação prolongada da CTX sobre a resposta inflamatória. (AU)