Estudo da adsorção de fosfatase alcalina em monocamadas de Langmuir contendo microdomínios lipídicos ricos em colesterol

Resumo

A biomineralização é um processo complexo envolvendo várias enzimas, entre elas a fosfatase alcalina tecido não específica (TNAP). O estudo da TNAP inserida em sistemas modelo de membrana, como proteolipossomos e monocamadas de Langmuir, são promissores e podem auxiliar o entendimento de tal processo. O colesterol presente em microdomínios proteicos em membranas biológicas tem papel importante na regulação da atividade de enzimas e da biomineralização. O objetivo deste projeto é estudar os efeitos da presença de colesterol na adsorção da enzima fosfatase alcalina em sistemas biomiméticos de membranas obtidos utilizando-se monocamadas de Langmuir em domínios formados na ausência e presença de esfingolipídios, constituinte das chamadas "jangadas lipídicas" (do inglês lipid raft) ou ainda de microdomínios lipídicos. Para tal estudo, serão utilizadas monocamadas de Langmuir, com a obtenção de isotermas p x A, para diferentes composições de fosfolipídeo, esfingolipídeo e colesterol na presença e ausência de TNAP. A influência da presença de colesterol e da composição das monocamadas na formação e morfologia dos microdomínios lipo-proteicos será acompanhada por imagens de microscopia de fluorescência que serão obtidas utilizando-se uma cuba de Langmuir acoplada a um microscópio de fluorescência, utilizando colesterol e dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC) marcados com fluoróforo. Os sistemas também serão caracterizados por meio de medidas de tensão superficial dinâmica e reologia das monocamadas, utilizando-se o método da gota pendente. A vantagem destes sistemas quando comparados com os proteolipossomos é a possibilidade de determinar relações proteína/lipídeos, estimar áreas por unidade proteica, bem como as correlações com atividade/pressão, entre outras. Todos os estudos serão realizados sob co-orientação do Prof. Pietro Ciancaglini (DQ-FFCLRP). (AU)