Aplicação de lacase na modificação de biomateriais e tecidos para uso oftalmológico e avaliação da produção da mesma por fungos endofíticos de Manihot Esculenta, Crantz

Resumo

Fungos endofíticos têm se mostrado fontes promissoras para a obtenção de enzimas com potencial biotecnológico. Assim, durante a realização do presente projeto, serão obtidas e purificadas as linhagens de fungos endofíticos associadas a folhas de mandioca, Manihot esculenta, Crantz. Após a obtenção das linhagens, as mesmas serão cultivadas em meio de cultura batata dextrose ágar (BDA). Após a purificação das linhagens, as mesmas serão submetidas ao processo de cultivo utilizando condições adequadas para a produção de lacases. Para isso, será utilizado um meio de cultura composto de extrato de malte, Tween 80, sulfato de cobre e 2,5-xilidina. Após o crescimento, fungos serão separados e submetidos ao processo de extração enzimática visando a obtenção de lacases. Durante essa etapa, será verificado o melhor tampão extrator e, também, a presença da enzima em cada linhagem previamente isolada e cultivada. Paralelamente, estudos relacionados a formação de ligações cruzadas em córneas e na obtenção de hidrogéis visando a substituição de humor vítreo utilizando lacases serão realizados. Assim, será verificada a influência da mesma na formação de reticulações bem como determinado o pH ideal, o tempo de reação, a concentração de enzima e a temperatura ideal de trabalho sendo utilizado, para isso, um planejamento estatístico. Serão realizados ensaios físicos, químicos, mecânicos, térmicos e de superfície visando a avaliação da presença de cross-link tanto nas córneas como durante a obtenção dos hidrogéis. Finalizando, os extratos que mostrarem a presença de lacases serão testados nas condições previamente determinadas sendo realizada uma pré purificação da enzima de interesse. (AU)