Desenvolvimento de dispositivo de transfecção a partir de nanopartículas funcionalizadas por LbL para entrega específica do sistema CRISPR/Cas9

Resumo

A descoberta do sistema CRISPR/Cas9 proporcionou um grande avanço no ramo da terapia gênica devido a sua grande eficiência em editar o DNA em uma grande variedade de modelos celulares, sendo que, simultaneamente, possui simplicidade experimental e baixo custo. Entretanto, ainda há barreiras a serem superadas para explorar seu grande potencial, como a entrega deste sistema a alvos de forma específica, e ainda, proporcionando segurança biológica. Com este viés, este projeto tem como objetivo o desenvolvimento de um dispositivo não viral para terapia gênica, com enfoque no sistema CRISPR/Cas9. Assim, serão produzidas tanto nanopartículas de ouro como nanopartículas e nanocápsulas de materiais poliméricos (PLGA, PCL e quitosana) funcionalizadas por meio da técnica de Layer-by-Layer (LbL); e este sistema de transporte será responsável por carregar e entregar especificamente o complexo CAS9-gRNA, podendo ainda cotransportar dupla fitas que será integrada ao genoma de modelos celulares (DNA doador). As multicamadas possuem, também, função de carregar, proteger e proporcionar a liberação controlada no interior das células modelos, sendo que a camada mais externa integrará moléculas que possuem receptores superexpressos em membranas de células tumorais para promover a entrega específica a estes tipos celulares. O modelo celular escolhido como prova de conceito da eficácia de transfecção e edição gênica é o SKBR3, que possui superexpressão do receptor de membrana HER2, o que permite utilizar a trastuzumabe (Herceptin®, anticorpo específico da HER2) como a espécie para direcionar especificamente a entrega do sistema CRISPR/Cas9. O gene alvo do CRISPR/Cas9 será o gene RAS, um oncogene envolvido na sinalização celular que regula diferenciação e a proliferação celular, o que o torna diretamente relacionado ao aparecimento de diferentes tipos tumorais, incluindo o Câncer de Mama. (AU)