O papel das vesículas extracelulares na comunicação intercelular em complexos cumulus-oócitos bovinos durante a maturação in vitro

Resumo

Técnicas de reprodução assistida (TRA) são alternativas para infertilidade e para aumentar a produção de animais domésticos. Apesar destas técnicas serem amplamente utilizadas, elas podem causar consequências negativas desde a gestação inicial até a vida adulta. Tentativas de mimetizar o ambiente in vivo são aplicadas para melhorar problemas causados pelas TRAs. Vesículas extracelulares (VEs) secretadas por células são importantes alvos de estudo devido suas funções na comunicação intercelular. Estas VEs estão presentes em diferentes fluidos corporais e possuem material bioativo, como RNAs e proteínas. Demonstrou-se que VEs possuem importante papel durante a maturação in vitro de oócitos e o desenvolvimento embrionário. Porém, o mecanismo de comunicação mediado por VEs em complexos cumulus-oócitos (CCOs) ainda é pouco esclarecida. Desta forma, a hipótese deste estudo é que VEs pequenas secretadas no fluido folicular podem ser internalizada por células do cumulus e transportadas ao ooplasma via projeções transzonais (TZPs), influenciando o acumulo de RNA no oócito. O objetivo deste estudo é investigar a relação entre VEs pequenas do fluido folicular e CCOs durante a maturação in vitro, bem como o impacto deste trânsito no acumulo de RNA em oócitos. Para isto, VEs pequenas serão isoladas de fluido folicular bovino, coradas com corante de membrana e suplementadas ao meio de maturação para determinar o transito intercelular a partir de imagens de microscopia ao vivo. Ademais, os CCOs suplementados com VEs pequenas serão coletados em 0, 2 e 4 horas de maturação in vitro. O RNA total e os filamentos de actina serão corados para quantificar o RNA localizado nas TZPs e no ooplasma utilizando microscopia confocal. Em conclusão, este estudo irá descrever um importante mecanismo de comunicação intercelular mediado por VEs durante a maturação oocitária e sua influência no transporte de RNA. (AU)