Identificação de fatores de estresse e sua influência em alterações no genótipo-fenótipo durante a produção de L-Asparaginase por Escherichia coli

Resumo

Leucemia Linfóide Aguda (LLA) é um câncer hematológico, que ocorre predominantemente em crianças. A enzima L-Asparaginase (ASNase) é utilizada em todos os protocolos para tratar LLA, resultando em cera de 90% de cura em crianças. O principal objetivo do presente projeto de doutorado (Processo FAPESP 2018/24926-3) é desenvolver um bioprocesso industrialmente atrativo para a produção de ASNase em biorreatores, como uma fase necessária para o escalonamento e futura produção industrial. Estudos iniciais foram realizados utilizando uma cepa de Escherichia coli recombinante contendo um plasmídeo para a expressão de ASNase. Entre três meios de cultura testados, um meio quimicamente definido foi escolhido para estudos posteriores em biorreatores. Utilizando a estratégia de batelada alimentada, foi possível atingir alta densidade celular, com 50 g/L de biomassa seca em biorreator. Como auxílio ao desenvolvimento do processo, uma análise combinada de transcriptoma e proteoma quantitativo será realizada no Centro de Proteômica do King's College London, para monitorar alterações no genótipo-fenótipo em resposta a condições de estresse durante o cultivo em batelada alimentada. A presente proposta é um esforço conjunto entre a Universidade de São Paulo e o KCL ara desenvolver um processo industrial de produção de ASNase, tendo em vista o potencial científico e tecnológico dessas instituições. A proposta também é parte de um programa de duplo doutorado entre as faculdades de ciências farmacêuticas de ambas instituições.