Avaliação in vivo de L-asparaginase humanizada livre e nanoencapsulada em lipossomos

Resumo

O presente projeto de doutorado faz parte do projeto temático (processo Fapesp 2013/08617-7) visando o desenvolvimento de proteoformas inovadoras da L-asparaginase (ASNase) para aplicação no tratamento da Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA). Atualmente, não há produção nacional desse biofármaco. Mais especificamente, investigaremos os processos upstream e downstream de ASNase de Erwinia chrysanthemi expressa por Pichia pastoris em biorreator. Essa linhagem, chamada Glycoswitch®, expressa proteínas com padrões de glicosilação mais semelhantes à glicosilação humana. A associação de diversas áreas, como biologia molecular e nanobiotecnologia, pode melhorar ainda mais os protocolos no tratamento da LLA. Neste contexto, os lipossomos são nanocarreadores formados pela autoagregação de fosfolipídios, capazes de transportar moléculas hidrofílicas como as proteínas. Uma hipótese é que as glicosilações mascaram sítios imunogênicos atenuando a resposta imune quando injetados por via intravenosa. Outra hipótese é quando esta ASNase menos imunogênica é encapsulada nos lipossomos, ocorre um aumento no seu tempo de meia-vida. Assim, o principal objetivo deste estágio é avaliar a atividade da ASNase, o tempo de meia-vida e o título de anticorpos de camundongos Balb/c após a administração das proteoformas da ASNase humanizadas e wild type livre e nanoencapsulada em lipossomas (1,2-dioleoyl-sn -glicerol-3-fosfocolina - DOPC). Os dados desses experimentos irão fornecer uma grande compreensão sobre como o sistema imunológico reage a essas inovações, em comparação com as formulações atuais disponíveis no mercado.