Desenvolvimento de processo de purificação de L-asparaginase humanizada e sua caracterização

Resumo

A busca por novos biofármacos está mobilizando setores acadêmicos, industriais e governamentais no desenvolvimento de processos biotecnológicos que viabilizem a produção em escala industrial de princípios ativos que ajam contra determinada desordem e minimizem seus efeitos colaterais, como é o caso do biofármaco antileucêmico L-asparaginase. A Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA) é uma desordem do sistema autoimune que se caracteriza pela produção excessiva de linfoblastos que sofreram mutação e se tornaram incapazes de sintetizar o aminoácido L-asparagina. A atuação da enzima L-asparaginase consiste em sua ação catalítica seletiva de forma a promover a desaminação do aminoácido L-asparagina circulante no sangue em ácido aspártico e amônia. Na ausência deste aminoácido, essencial para os linfoblastos lecucêmicos, a síntese de DNA, RNA e proteínas é comprometida ocasionando apoptose celular. As células saudáveis, por sua vez, não são afetadas por serem autossuficientes na síntese deste aminoácido. A alta incidência das manifestações imunogênicas indesejadas em pacientes medicados com formulações de L-Asparaginase existentes no mercado reflete na necessidade do melhoramento no protocolo de tratamento da LLA. A elucidação das propriedades físico-químicas e cinéticas dessa enzima, bem como a busca por novas fontes alternativas e inovadoras, condições otimizadas de cultivo e implementação de metodologias adequadas de purificação, contribuirão com novas perspectivas para a produção nacional de um potencial biofármaco que não apresente as limitações das atuais formulações. Em trabalhos desenvolvidos recentemente em nosso laboratório passamos a produzir L-Asparaginase II expressa por Erwinia chrysanthemi em vetor Pichia pastoris, sendo que o presente projeto tem por objetivo principal estabelecer a melhor estratégia de purificação da enzima para que seja avaliada seu potencial como biofármaco adequado a fins terapêuticos. (AU)