Bolsa 16/15787-4 - Leucemia-linfoma linfoblástico de células precursoras, Biofármacos - BV FAPESP
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Clonagem de L-asparaginase de Escherichia coli em linhagem de Pichia Pastoris com glicosilação humanizada

Processo: 16/15787-4
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2016
Data de Término da vigência: 30 de junho de 2018
Área de conhecimento:Ciências Biológicas - Farmacologia - Farmacologia Bioquímica e Molecular
Pesquisador responsável:Gisele Monteiro
Beneficiário:Guilherme Meira Lima
Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:13/08617-7 - Produção de L-asparaginase extracelular: da bioprospecção à engenharia de um biofármaco antileucêmico, AP.TEM
Assunto(s):Leucemia-linfoma linfoblástico de células precursoras   Biofármacos   Antineoplásicos   Asparaginase   Pichia pastoris   Escherichia coli   Glicosilação   Imunogenicidade
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:antitumoral | asparaginase | Biofármaco | engenharia de proteína | Expressão heteróloga de proteínas

Resumo

Atualmente, a leucemia linfoide aguda (LLA) é o tipo de câncer mais frequente entre crianças e adolescentes e destaca-se, como uma das principais formas de tratamento existentes para o seu combate, a administração de L-Asparaginase (L-ASNase). Esta enzima apresenta diversas formas no mercado, diferindo-se umas das outras principalmente quanto ao organismo de origem (Escherichia coli ou Erwinia chrysanthemi) e modificação química. No entanto, muitos desses biofármacos possuem certas desvantagens, uma vez que podem ocasionar reações imunogênicas e consequentemente serem rapidamente depuradas do organismo por diferentes mecanismos de eliminação. Com base nisso, propõe-se nesse projeto expressar a enzima L-ASNase com estrutura proteica glicosilada, visando uma menor resposta imunogênica quando administrada no organismo e um aumento do seu efeito terapêutico. Para isso, buscaremos clonar a L-ASNase proveniente de Escherichia coli em organismos eucariontes, mais precisamente leveduras da linhagem de Pichia pastoris geneticamente modificadas. O objetivo do trabalho é avaliar se a linhagem será capaz de realizar glicosilação humanizada além de expressar e secretar a proteína de interesse com alta eficiência. A glicosilação, portanto, favoreceria o mascaramento da enzima, uma estratégia que poderia permitir consequentemente uma ação mais eficaz deste biofármaco no tratamento da LLA.

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
EFFER, BRIAN; LIMA, GUILHERME MEIRA; CABARCA, SINDY; PESSOA, ADALBERTO; FARIAS, JORGE G.; MONTEIRO, GISELE. L-Asparaginase from E. chrysanthemi expressed in glycoswitch: effect of His-Tag fusion on the extracellular expression. PREPARATIVE BIOCHEMISTRY & BIOTECHNOLOGY, v. 49, n. 7, . (17/20384-9, 16/25896-5, 15/07749-2, 13/08617-7, 16/15787-4)
EFFER, BRIAN; KLEINGESINDS, EDUARDO KREBS; LIMA, GUILHERME MEIRA; COSTA, IRIS MUNHOZ; SANCHEZ-MOGUEL, IGNACIO; PESSOA, ADALBERTO; SANTIAGO, VERONICA FEIJOLI; PALMISANO, GIUSEPPE; FARIAS, JORGE G.; MONTEIRO, GISELE. Glycosylation of Erwinase results in active protein less recognized by antibodies. Biochemical Engineering Journal, v. 163, p. 11-pg., . (13/08617-7, 15/07749-2, 17/20384-9, 18/15104-0, 16/15787-4, 16/25896-5)
LIMA, GUILHERME MEIRA; EFFER, BRIAN; BIASOTO, HENRIQUE PELLIN; FEIJOLI, VERONICA; PESSOA, ADALBERTO; PALMISANO, GIUSEPPE; MONTEIRO, GISELE. Glycosylation of L-asparaginase from E. coli through yeast expression and site-directed mutagenesis. Biochemical Engineering Journal, v. 156, . (15/07749-2, 13/08617-7, 14/06863-3, 18/18257-1, 18/15549-1, 16/15787-4)

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