L-Asparaginase from E. chrysanthemi expressed in glycoswitch: effect of His-Tag fusion on the extracellular expression

Autor(es)

Effer, Brian ^{[1, 2]} ; Lima, Guilherme Meira ^[1] ; Cabarca, Sindy ^{[3, 4]} ; Pessoa, Adalberto ^[1] ; Farias, Jorge G. ^[2] ; Monteiro, Gisele ^[1]

Afiliação do(s) autor(es)

^[1] Univ Sao Paulo, Sch Pharmaceut Sci, Dept Biochem & Pharmaceut Technol, Prof Lineu Prestes 580, BR-05508000 Sao Paulo - Brazil

^[2] Univ La Frontera, Fac Engn & Sci, Dept Chem Engn, Francisco Salazar - Chile

^[3] Univ Sao Paulo, Lab Appl Struct Biol, Dept Microbiol, Sao Paulo - Brazil

^[4] Univ Estadual Campinas, Inst Biol, Campinas - Brazil

• Tipo de documento: Artigo Científico
• Fonte: PREPARATIVE BIOCHEMISTRY & BIOTECHNOLOGY; v. 49, n. 7 APR 2019.
• Citações Web of Science: 0

Resumo

L-Asparaginase (L-ASNase) is an important enzyme used to treat acute lymphoblastic leukemia, recombinantly produced in a prokaryotic expression system. Exploration of alternatives production systems like as extracellular expression in microorganisms generally recognized as safe (such as Pichia pastoris Glycoswitch) could be advantageous, in particular, if this system is able to produce homogeneous glycosylation. Here, we evaluated extracellular expression into Glycoswitch using two different strains constructions containing the asnB gene coding for Erwinia chrysanthemi L-ASNase (with and without His-tag), in order to find the best system for producing the extracellular and biologically active protein. When the His-tag was absent, both cell expression and protein secretion processes were considerably improved. Three-dimensional modeling of the protein suggests that additional structures (His-tag) could adversely affect native conformation and folding from L-ASNase and therefore the expression and cell secretion of this enzyme. (AU)

• Processo FAPESP: 17/20384-9 - Desenvolvimento de processo de purificação de L-asparaginase humanizada e sua caracterização
• Beneficiário: Eduardo Krebs Kleingesinds
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Processo FAPESP: 16/25896-5 - Caracterização bioquímica e avaliação citotóxica de isoformas mutantes de L-Asparaginase II de Dickeya chrysanthemi (Erwinia chrysanthemi)
• Beneficiário: Iris Munhoz Costa
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Processo FAPESP: 15/07749-2 - Engenharia de proteínas e comparação de sistemas microbianos de expressão do biofármaco L-asparaginase
• Beneficiário: Gisele Monteiro
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Processo FAPESP: 13/08617-7 - Produção de L-asparaginase extracelular: da bioprospecção à engenharia de um biofármaco antileucêmico
• Beneficiário: Adalberto Pessoa Junior
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Temático
• Processo FAPESP: 16/15787-4 - Clonagem de L-asparaginase de Escherichia coli em linhagem de Pichia Pastoris com glicosilação humanizada
• Beneficiário: Guilherme Meira Lima
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica