Clonagem de L-Asparaginase de Escherichia coli em linhagem de Pichia pastoris com glicosilação humanizada

Resumo

Atualmente, a leucemia linfoide aguda (LLA) é o tipo de câncer mais frequente entre crianças e adolescentes e destaca-se, como uma das principais formas de tratamento existentes para o seu combate, a administração de L-Asparaginase (L-ASNase). Esta enzima apresenta diversas formas no mercado, diferindo-se umas das outras principalmente quanto ao organismo de origem (Escherichia coli ou Erwinia chrysanthemi) e modificação química. No entanto, muitos desses biofármacos possuem certas desvantagens, uma vez que podem ocasionar reações imunogênicas e consequentemente serem rapidamente depuradas do organismo por diferentes mecanismos de eliminação. Com base nisso, propõe-se nesse projeto expressar a enzima L-ASNase com estrutura proteica glicosilada, visando uma menor resposta imunogênica quando administrada no organismo e um aumento do seu efeito terapêutico. Para isso, buscaremos clonar a L-ASNase proveniente de Escherichia coli em organismos eucariontes, mais precisamente leveduras da linhagem de Pichia pastoris geneticamente modificadas. O objetivo do trabalho é avaliar se a linhagem será capaz de realizar glicosilação humanizada além de expressar e secretar a proteína de interesse com alta eficiência. A glicosilação, portanto, favoreceria o mascaramento da enzima, uma estratégia que poderia permitir consequentemente uma ação mais eficaz deste biofármaco no tratamento da LLA.