| Texto completo | |
| Autor(es): |
Lima, Guilherme Meira
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Effer, Brian
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Biasoto, Henrique Pellin
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Feijoli, Veronica
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Pessoa, Adalberto
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Palmisano, Giuseppe
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Monteiro, Gisele
Número total de Autores: 7
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| Tipo de documento: | Artigo Científico |
| Fonte: | Biochemical Engineering Journal; v. 156, p. 11-pg., 2020-04-15. |
| Resumo | |
L-Asparaginase (L-ASNase) is a key component in the treatment of acute lymphoblastic leukemia (ALL), but several clinical disadvantages, such as immunogenicity and rapid clearance, are still present. We evaluated the possibility to synthesize a new L-ASNase from Escherichia coll. with human-like glycosylation and study the glycosylation effect on the biochemical properties of the enzyme. Six L-ASNase mutants were also created in which L-ASNase glycosylation sites were removed through site-directed mutagenesis. The WT L-ASNase was successfully expressed, secreted and glycosylated by an engineered P. pastoris strain and presented predominantly Man 5 G1cNAc 2 glycans on its structure, which were then able to decrease L-ASNase immunogenicity in vitro. The purified glycosylated L-ASNase has shown a 30-fold decrease in specific enzymatic activity compared to the non-glycosylated proteoform, but a triple mutant L-ASNase (3M) was able to restore L-ASNase biological activity to significant levels. 3M accumulated in the yeast periplasmic space and there presented a 28fold increase in enzymatic activity when compared to the fully glycosylated proteoform. Both WT and 3M L-ASNases presented increased stability in human serum compared to non-glycosylated L-ASNase. This study demonstrates the important effects of glycosylation on L-ASNase properties and opens up new possibilities to use glycosylated L-ASNases for the treatment of ALL. (AU) | |
| Processo FAPESP: | 14/06863-3 - Modificações pós-traducionais para o diagnóstico de câncer e doenças parasitárias: abordagens metodológicas e implicações biológicas |
| Beneficiário: | Giuseppe Palmisano |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Jovens Pesquisadores |
| Processo FAPESP: | 16/15787-4 - Clonagem de L-Asparaginase de Escherichia coli em linhagem de Pichia pastoris com glicosilação humanizada |
| Beneficiário: | Guilherme Meira Lima |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Iniciação Científica |
| Processo FAPESP: | 18/15549-1 - Modificações pós-traducionais nos processos biológicos e no diagnóstico da Doença de Chagas: novas abordagens metodológicas e implicações biológicas |
| Beneficiário: | Giuseppe Palmisano |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Jovens Pesquisadores - Fase 2 |
| Processo FAPESP: | 18/18257-1 - EMU concedido no processo 14/06863-3: sistema de cromatografia líquida configurado para análise de carboidratos, aminoácidos, peptídeos e glicoproteínas |
| Beneficiário: | Giuseppe Palmisano |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Programa Equipamentos Multiusuários |
| Processo FAPESP: | 15/07749-2 - Engenharia de proteínas e comparação de sistemas microbianos de expressão do biofármaco L-asparaginase |
| Beneficiário: | Gisele Monteiro |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Regular |
| Processo FAPESP: | 13/08617-7 - Produção de L-asparaginase extracelular: da bioprospecção à engenharia de um biofármaco antileucêmico |
| Beneficiário: | Adalberto Pessoa Junior |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Temático |