Ativação in vivo, diferenciação e função efetora de células alvo específicas do antígeno por linfócitos T CD8+: papel da Caspase1, GSDMD, RIPK3 e MLKL

Resumo

As células tumorais, bem como os vírus e outros patógenos intracelulares, desafiam persistentemente o ser humano. Nesse cenário, a ativação e a função efetora dos linfócitos T CD8+ específicos para o antígeno representam uma resposta imunológica importante, uma vez que essas células podem eliminar células infectadas ou transformadas induzindo sua morte (apoptose). Este projeto irá investigar o possível envolvimento das principais moléculas regulatórias e efetoras de necroptose (RIPK3 e MLKL) e piroptose (Caspase-1 e GSDMD) na ativação, diferenciação e função efetora in vivo de células T CD8+ específicas para antígenos. Camundongos C57Bl/6 de tipo selvagem (WT), ripk3-/-, mlkl-/-, casp-1-/-, gsdmd-/-, gsdmd/mlkl-/- serão imunizados com o vetor 5 adenoviral humano recombinante transportando o gene da ovalbumina (rhAd5.OVA). O ensaio de citotoxicidade in vivo determinará a eficiência da eliminação das células-alvo pelos linfócitos T CD8+. O ELISPOT será empregado para avaliar a frequência de linfócitos T CD8+ específicos para OVA e a citometria de fluxo multicolorida será utilizada para avaliar o nível de marcadores de ativação, citocinas, granzimas, entre outros. A análise estatística será feita utilizando GraphPad prism v7, análise de variância (ANOVA) two-way com os grupos de fatores e condição (imunizado, não imunizado). As ANOVAs univariadas serão aplicadas para cada variável dependente e o nível de significância (originalmente 5%) será ajustado para baixo de acordo para proteger contra um erro tipo I inflacionado. (AU)