Aplicação de espectrometria de massas sequencial no desenvolvimento de métodos analíticos na identificação de metabolitos microbianos polares

Resumo

A importância da química de produtos naturais microbianos como fonte de moléculas bioativas é indiscutível. O isolamento e identificação de metabólitos secundários produzidos por microrganismos é de suma importância para indústria química, farmacêutica e agroquímica. Estudos revelaram que alguns metabólitos secundários microbianos, codificados nos genomas, permanecem a serem descobertos, provavelmente, porque esses genes não são transcritos sob condições laboratoriais. Várias abordagens têm sido realizadas na tentativa de ativação dessas vias biossintéticas crípticas, as quais incluem modificações dos meios de cultivo (OSMAC- do inglês, one strain many compounds), co-cultivo, cultivo misto, entre outros. Da mesma forma, diferentes metodologias analíticas baseadas em LC-MS/MS, tais como desreplicação, molecular networking e MS-imaging, foram desenvolvidas nesta última década com o objetivo de acelerar a anotações ou identificações de metabólitos secundários presentes nos extratos brutos. Porém, poucos estudos são descritos na literatura visando o desenvolvimento de metodologias de preparo de amostras, para isolamento de metabólitos polares produzidos por microrganismos. Por esta razão, este projeto de pesquisa tem como objetivo avaliar diferentes técnicas de preparo de amostras para a identificação de metabólitos secundários polares bioativos. Para isso serão avaliadas novas metodologias de preparo de amostras empregando SPME na forma Coated Blade Spray (CBS) a qual permite um acoplamento direto a fonte de ionização do MS. A CBS é uma das tecnologias mais abrangentes no preparo de amostra. Também serão avaliadas as técnicas de extração liquido-liquido em modo convencional e por "QuEChERs". Para o desenvolvimento desta metodologia serão utilizados metabólitos polares comerciais, tais como, antibióticos amino glicosídeos, fosfonados e sulfonados. A metodologia desenvolvida será aplicada em amostras de processos fermentativos com actinobactérias produtoras de amino glicosídeos e na coleção de microrganismos presentes em nosso laboratório. (AU)