Avaliação da atividade antitumoral e toxicidade de drogas híbridas (2-Arilquinazolino-chalconas) usando a plataforma de High Content Screening (HCS)

Resumo

O desenvolvimento de fármacos antineoplásicos baseia-se na descoberta de moléculas eficientes, de menor custo e específicas para a célula tumoral. As moléculas híbridas ganharam destaques nos últimos anos, por atuarem de forma sinérgica com doses reduzidas e com menor probabilidade de desenvolver resistência, comparadas ao uso individual de terapias. A triagem de uma nova molécula pode ser realizada por plataformas automatizadas, como de High Content Screening (HCS). Esta plataforma utiliza parâmetros de imagem para determinar a citotoxicidade de uma molécula, que é em seguida validada de forma analítica e experimental. O objetivo deste projeto é avaliar o potencial antineoplásico de moléculas híbridas e inéditas, utilizando uma plataforma HCS, e seus parâmetros ADME in silico. De acordo com nossos resultados preliminares de direcionamento in silico (CortellisTM), serão usadas linhagens de mama MDA-MB-231, T-47D e BT-474 para triagem das 15 moléculas híbridas. A obtenção dos hits será realizada por modelo tridimensional de cultura celular (3D), monitorado pela intensidade de fluorescência (Calceína-AM), e posterior validação estatística. A seguir, a citotoxicidade dos hits selecionados será avaliada em tempo real (0-72 horas), pelo ensaio fluorescente RealTime-Glo" MT, e a avaliação dos parâmetros de morte e ciclo celular serão medidos por citometria de fluxo. Finalmente as células serão tratadas com as melhores moléculas híbridas (IC50), para avaliar as alterações nas vias de sinalização proliferativa e morte, usando arranjos proteícos phopho-RTK array, phopho-MAPK array e apoptosis signaling pathways arrays (R&D Systems).