Caracterização do efeito do butirato de sódio sobre os receptores de ácidos graxos de cadeia curta no sistema nervoso entérico de camundongos submetidos à colite ulcerativa experimental

Resumo

As Doenças Inflamatórias Intestinais afetam os neurônios do Sistema Nervoso Entérico (SNE). O Butirato é um ácido graxo de cadeia curta (AGCC) produzido pelas bactérias da microbiota intestinal, a partir da fermentação das fibras alimentares. Ele se liga aos receptores de ácidos graxos acoplados à proteína G, como o GPR41, GPR43 e GPR109A, e desencadeia efeitos anti-inflamatórios, melhora na barreira intestinal e proteção contra patógenos. A literatura relata a presença dos receptores de a AGCC no SNE, entretanto não se sabe em quais tipos de neurônios estes receptores estão presentes e quais são seus efeitos nestes neurônios. Além disso, o Butirato tem sido promissor no tratamento da colite ulcerativa devido aos seus efeitos anti-inflamatórios. Diante disto, este projeto tem por objetivo estudar os receptores GPR43 e GPR109A e analisar o uso do Butirato nos neurônios do plexo mioentérico de camundongos submetidos à colite ulcerativa experimental. Para isto, será injetado, intrarretal, 100 µL do ácido 2, 4, 6 trinitrobenzeno sulfônico (TNBS) 1,5% em camundongos C57BL/6 (Grupo TNBS). O grupo Sham receberá etanol 35% (veículo). Um grupo de animais será tratado com 100mg/kg de Butirato de Sódio (grupo BUT), via gavagem, e os grupos TNBS e Sham receberão salina. Os animais serão eutanasiados 7 dias após a injeção de TNBS ou veículo. Serão analisados: A) A colocalização dos receptores GPR43, GPR43 e GPR109A com neurônios imunorreativos (-ir) à óxido nítrico sintase neuronal (nNOS), colina acetiltransferase (ChAT), Calretina (Carl), Calbindina (Calb), ao marcador pan-neuronal PGP9.5 e com glias imunorreativas ao marcador glial proteína fibrilar glial ácida (GFAP); B) Duplas marcações de imunofluorescênci da Caspase-3 não clivada, Caspase-3 clivada, NF-ºB e Acetil-histona 3 nos neurônios nNOS-ir, ChAT-ir, Calr-ir, Calb-ir e PGP9.5-ir; C) O número de neurônios/gânglio GPR43-ir, GPR109A-ir, nNOS-ir, ChAT-ir, Calr-ir, Calb-ir, PGP9.5-ir e de gliais GFAP-ir por gânglio; D) A área dos neurônios nNOS-ir, ChAT-ir, Calr-ir, Calb-ir e PGP9.5-ir; E) A Fluorescência Celular Total Corrigida (CTCF) dos neurônios GPR43-ir, GPR109A-ir, nNOS-ir, ChAT-ir, Calr-ir, Calb-ir, PGP9.5-ir e de gliais GFAP-ir; F) A morfologia do colo distal pela técnica de histologia, utilizando-se coloração de Hematoxilina & Eosina, Ácido Periódico de Schiff e Picrosirius Red; G) As proteínas de junção intercelular (tight junctions) ZO-1 e ocludina; H) A expressão proteica dos receptores GPR41, GPR43 e GPR109A, da caspase-3 clivada, do NF-º², da histona desacetilase e das MAPKinases (ERK1e ERK2); I) A expressão gênica dos receptores GPR41, GPR43 e GPR109A, caspase-3 clivada, do NF-ºB, da histona acetilada e das MAPKinases (ERK1e ERK2); J) A morte neuronal por meio de Apoptose utilizando-se a técnica do Tunel; K) O trânsito intestinal e a motilidade intestinal; L) Mediadores inflamatórios por meio da dosagem de IL-1², IL-6, IL-10 e TNF-± através de ensaios imunoenzimáticos. Os resultados serão expressos em média ± erro-padrão e será feita a análise estatística com o nível de significância de p<0,05.